1、研究背景:
　　急性心肌梗死是臨床上常見的急危重癥，可誘導機體的炎癥反應。這不僅出現(xiàn)在心臟本身，也出現(xiàn)在肺部，其急性期主要表現(xiàn)為炎癥細胞和炎癥因子在肺部浸潤;然后逐漸出現(xiàn)膠原纖維的過量積聚。目前AMI對肺臟的影響研究較少。
　　樹突狀細胞是功能最強和唯一能誘導機體初始免疫應答的抗原遞呈細胞，能夠啟動和維持組織器官的炎癥反應。成熟DCs遞呈外來或自身抗原并激活T細胞，啟動或維持炎癥反應，但其在心肌梗死所致肺部炎癥和纖維化中的作

2、用尚未明確。
　　本課題首先通過建立小鼠急性心肌梗死模型，探討急性心肌梗死對肺臟的影響。進一步通過T細胞增殖實驗檢測DCs的免疫調(diào)節(jié)功能，探討DCs在急性心肌梗死引起肺臟改變中可能的作用。
　　第一部分急性心肌梗死相關性肺部炎癥反應
　　目的:
　　通過建立小鼠急性心肌梗死模型，探討急性心肌梗死對肺臟的影響。
　　方法:
　　(1)通過結扎左冠脈前降支建立小鼠急性心肌梗死模型，在1周及2周后行心超檢測

3、及血清BNP水平。
　　(2)分組:對照組（Sham組），急性心梗后1周組（MW1組）;急性心梗后2周組（MW2組）。
　　(3)分別在1周及2周后檢測以下指標:①肺泡灌洗液細胞分類計數(shù)和肺濕干重比;②肺組織HE染色、Masson染色及TUNEL法檢測細胞凋亡;③肺組織中ACE、CD11c、CD68、α-SMA、TLR4、TLR9的免疫組化檢測;④采用CBA法，檢測血漿和BALF中IL-6、MCP-1、IL-12p70、TN

4、F-α、IL-10水平;⑤采用流式細胞儀檢測肺組織單細胞懸液中CD45、CD11c及TLR9陽性的細胞比例。
　　結果:
　　在急性心肌梗死后1周時，血漿中IL-6、MCP-1、IL-12p70、TNF-α、IL-10水平較Sham組顯著增高(p＜0.05)。Sham組BALF中的細胞數(shù)量少，分類以巨噬細胞為主;MW1組的中性粒細胞明顯增加(p＜0.05)。IL-6、IL-12p70水平也顯著升高(p＜0.05)。肺組織也出

5、現(xiàn)系列改變，其中HE染色顯示:MW1組小鼠肺組織充血、肺泡腔內(nèi)有滲出液、肺泡間隔明顯增厚、肺間質(zhì)水腫、炎癥細胞浸潤、毛細血管擴張充血;肺內(nèi)凋亡細胞明顯增加(p＜0.05)。免疫組化結果顯示，ACE、CD11c、CD68、α-SMA、TLR4、TLR9表達較Sham組顯著增加(p＜0.05)。流式細胞儀檢測肺組織單細胞懸液中TLR9陽性細胞顯著增加(p＜0.05)。Masson染色顯示，肺內(nèi)已出現(xiàn)纖維組織增生，肺濕/干重比(W/D)下降(

6、p＜0.05)。
　　在急性心肌梗死后2周時，血漿中IL-6、MCP-1、IL-12p70、TNF-α、IL-10水平仍持續(xù)顯著增高(p＜0.05)。BALF中性粒細胞仍增加明顯(p＜0.05); IL-6、MCP-1、IL-12p70、TNF-α、IL-10水平均顯著升高(p＜0.05)。肺組織HE染色示MW2組小鼠肺組織較MW1組充血水腫明顯減輕、炎癥細胞減少，但肺間質(zhì)明顯增厚。肺內(nèi)凋亡細胞增加明顯(p＜0.05)。免疫組化結

7、果顯示，ACE、CD11c、CD68、α-SMA仍有上升趨勢(p＜0.05)。TLR4、TLR9無明顯變化。流式細胞儀檢測肺組織單細胞懸液中CD45、CD11c及TLR9陽性的細胞顯著增多(p＜0.05)。Masson染色顯示，肺間質(zhì)、支氣管及肺血管周圍纖維化更顯著(p＜0.05)。肺濕/干重比(W/D)顯著下降(p＜0.05)。
　　結論:
　　(1)急性心肌梗死后1周，肺組織出現(xiàn)了以炎性細胞浸潤和炎癥因子增加為主的急性炎

8、癥反應。
　　(2)急性心肌梗死后2周時，肺部炎癥反應仍持續(xù)存在，但更為顯著的變化是肺間質(zhì)、支氣管及肺血管周圍的纖維化。
　　第二部分心肌壞死物激活樹突狀細胞的炎癥反應
　　目的:
　　探討DCs在急性心肌梗死后肺部炎癥反應中可能起到的作用。
　　方法:
　　(1)分組:對照組（CONTR組）;干預組（MEDIUM組）
　　(2)將壞死心肌細胞的上清加入小鼠骨髓源性DCs中培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)學變

9、化，流式細胞儀檢測MHC-Ⅱ、CD40、CD80、CD83、CD86，CBA法檢測培養(yǎng)上清中TNF-α、IFN-γ水平，Western Blot法檢測NF-κB蛋白表達。
　　(3)從小鼠脾臟獲取CD4+T細胞，并與干預后的DCs共培養(yǎng)，流式細胞儀檢測T細胞的增殖水平。
　　結果:
　　(1)將小鼠骨髓源性DCs加入GM-CSF和IL-4培養(yǎng)后，細胞呈半懸浮樣生長，突起明顯，胞體變大，形態(tài)不規(guī)則。加入壞死心肌細胞的上清

10、培養(yǎng)后，DCs的突起明顯增多、變長。
　　(2)采用流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)DCs加入壞死心肌細胞的上清培養(yǎng)后，對CD80和CD83分子具有明顯的上調(diào)作用(p＜0.05)，而對CD40、CD86和MHC-Ⅱ并無上調(diào)作用，其中，對CD40有抑制趨勢。
　　(3)培養(yǎng)上清的細胞因子檢測發(fā)現(xiàn)TNF-α、IFN-γ水平較對照組顯著升高(p＜0.05)。
　　(4) Western Blot檢測NF-κB表達結果提示，MEDIUM組N