1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文兔成骨細(xì)胞的培養(yǎng)及生長(zhǎng)因子對(duì)其體外增殖影響的實(shí)驗(yàn)研究姓名：丁奕健申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：口腔科學(xué)指導(dǎo)教師：曹之強(qiáng);高建華2001.5.1兔成骨細(xì)胞的培養(yǎng)及生長(zhǎng)因子對(duì)其體外增殖影響的實(shí)驗(yàn)研究P B S 液洗滌后以1 x 1 0 6 ／m l 的細(xì)胞濃度進(jìn)行培養(yǎng)，2 周后得到貼壁生長(zhǎng)的單層細(xì)胞。隨后進(jìn)入傳代培養(yǎng)，通過倒置顯微鏡、H E 染色、掃描電鏡、透射電鏡、堿性磷酸酶( a l k a l i n e p h o s

2、 p h a t a s e ，A L P ) 染色、I 型膠原免疫組化染色、鈣染色等手段對(duì)獲得的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性研究。然后將細(xì)胞與載體材料聚乳酸( P L A ) 、膨體聚四氟乙烯( e V r F e ) 復(fù)合培養(yǎng)l 周后回植自體兔肌肉內(nèi)，4 周、8 周后植入部位取材，組織學(xué)方法觀察其體內(nèi)成骨能力。并采用體外培養(yǎng)的第5 代成骨細(xì)胞，用噻唑藍(lán)比色法，觀察胰島素樣生長(zhǎng)因子I I 、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子- B 這三種生長(zhǎng)

3、因子單獨(dú)及交互聯(lián)合應(yīng)用后對(duì)成骨細(xì)胞體外增殖的影響。繹f 果：在形態(tài)學(xué)上，本實(shí)驗(yàn)所培養(yǎng)的細(xì)胞能夠貼壁，呈多種形態(tài)，有粗細(xì)不均的胞漿突起，并且呈集落樣生長(zhǎng)，可相互重疊成復(fù)層生長(zhǎng)，并形成細(xì)胞結(jié)節(jié)。電鏡下可見典型的蛋白質(zhì)合成結(jié)構(gòu)t 胞漿富含線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，表明合成分泌功能旺盛，符合成骨細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)特性。在生化和組織化學(xué)上，培養(yǎng)細(xì)胞富含J 岫活性，主要合成I 型膠原，并且在條件培養(yǎng)基中可以鈣化( V o n K o s s a

4、染色陽(yáng)性) 。符合成骨細(xì)胞鑒定的標(biāo)準(zhǔn)。且細(xì)胞經(jīng)連續(xù)傳代，形態(tài)與功能不變。成骨細(xì)胞經(jīng)體外增殖，與載體復(fù)合培養(yǎng)后生長(zhǎng)良好。植入體內(nèi)后早期( 4 周時(shí)) 形成的骨基質(zhì)結(jié)構(gòu)疏松，‘周圍仍有較多成骨細(xì)胞，晚期( 8 周時(shí)) 則可見形成的骨樣組織結(jié)構(gòu)致密，．內(nèi)有骨細(xì)胞位于骨陷窩中，與典型的骨組織結(jié)構(gòu)基本相似。在相同培養(yǎng)條件下，三種生長(zhǎng)因子均能促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，I G F - I I 、b - F G F 這兩種生長(zhǎng)因子在0 ．1 —1 0 ．0 n