1、目的：急性淋巴性白血?。ˋcute lymphoblastic leukemia,ALL）是兒童最常見的惡性腫瘤之一，白血病細(xì)胞可廣泛浸潤(rùn)骨骼及肝、脾、淋巴結(jié)等髓外器官，髓外白血病易導(dǎo)致骨髓復(fù)發(fā)，是治療失敗的主要原因，因而髓外白血病的防治是ALL患兒獲得長(zhǎng)期生存的關(guān)鍵之一。趨化因子CXCR4是基質(zhì)細(xì)胞衍生因子（stromal cell derived factor,SDF-1）受體，SDF-1是主要由骨髓基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的趨化因子，兩者特異

2、地結(jié)合，在造血調(diào)節(jié)中起重要作用。SDF-1/CXCR4不僅參與維持正常造血細(xì)胞的存活和增殖，同時(shí)與惡性細(xì)胞增殖以及在血液、骨髓、淋巴結(jié)的浸潤(rùn)密切相關(guān)。RNA干擾（RNAi）作為一種新的基因阻斷技術(shù)，具有特異的、有效的基因沉默效應(yīng)，能夠簡(jiǎn)單、高效阻抑特定基因表達(dá)，已廣泛用于抗腫瘤的基因治療。Jurkat細(xì)胞系淋巴系起源的白血病細(xì)胞株，運(yùn)用RNAi技術(shù)，設(shè)計(jì)針對(duì)CXCR4特異性的siRNA轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞，采用RT-PCR觀察RNAi抑

3、制CXCR4基因表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Jurkat細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率。RNAi誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞發(fā)生凋亡和細(xì)胞周期阻滯，從而抑制細(xì)胞的增殖。用以探索ALL防治的新方法,為ALL治療提供理論依據(jù)。
　　方法：根據(jù)CXCR4cDNA符合特征的靶序列，設(shè)計(jì)并化學(xué)合成相關(guān)的siRNA。實(shí)驗(yàn)分三組：空白對(duì)照組A組：Control（不加入CXCR4-siRNA，Non-silencing dsRNA和DMRIE-C），B組：陰性對(duì)照組 No

4、n-silencing dsRNA（加入 Non-silencing dsRNA和DMRIE-C），C組：目的組CXCR4-siRNA（加入CXCR4-siRNA和DMRIE-C）。配成80nM的siRNA溶液。通過脂質(zhì)體DMRIE-C介導(dǎo)siRNA轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞，48h后RT-PCR檢測(cè)CXCR4基因表達(dá)水平，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布和細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果：兩對(duì)照組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），目的組

5、與兩對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。與空白對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染CXCR4-siRNA的Jurkat細(xì)胞的CXCR4mRNA表達(dá)水平明顯下降（56.9％±1.4%vs68.3%±2.4%）,G0/G1期細(xì)胞比例增加（35.9%±2.0%vs18.1%±1.3%），G2/M期和 S期細(xì)胞比例相應(yīng)下降（20.1%±1.1%vs27.7%±1.5%;44.4%±3.0%vs54.2%±2.6%），凋亡細(xì)胞明顯增加(20.7%±1.7