1、1，3-丙二醇(1，3-PD)是一種重要的化工原料，其生物合成過程已引起人們越來越多的重視。對(duì)巴斯德梭菌(Clostridiumpasteurianum)利用甘油產(chǎn)生1，3-PD的發(fā)酵研究表明，采用補(bǔ)料批式發(fā)酵時(shí)，其產(chǎn)量為13.1g.1-1，而主要副產(chǎn)物丁醇的合成量為17g.1-1。分析表明，在該發(fā)酵過程中，丁醇合成是主要代謝通路，1，3-PD的代謝流量僅占20％。為了降低丁醇產(chǎn)量，采用熱不對(duì)稱交錯(cuò)PCR(TAIL-PCR)，克隆了C.

2、pasteurianum中丁醇合成的關(guān)鍵酶基因——β-酮硫解酶基因，但是由于C.pasteurianum體內(nèi)的限制性內(nèi)切酶限制外源DNA，使得擬用反義RNA方法干擾丁醇合成基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)未能繼續(xù)。采用由Clostridiumpasteurianum的dhaBCE和Escherichiacoli的yqhD基因構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒pUDYP轉(zhuǎn)化產(chǎn)酸克雷伯氏桿菌(Klebsiellaoxytoca)，用于生產(chǎn)1，3-PD。微供氧發(fā)酵實(shí)驗(yàn)表明，工程菌

3、株K.oxytoca(pUDYP)的1，3-PD最高產(chǎn)量為52.9g.1-1，摩爾轉(zhuǎn)化率為56.17％，發(fā)酵初期(0-16h)的生產(chǎn)強(qiáng)度比野生型菌株K.oxytoca高44.7％，發(fā)酵16h后，由于質(zhì)粒不穩(wěn)定，導(dǎo)致K.oxytoca(pUDYP)的生產(chǎn)強(qiáng)度迅速降低。用NTG對(duì)C.pasteurianum進(jìn)行誘變，然后經(jīng)高濃度1，3-PD耐受和產(chǎn)酸少模型兩輪篩選，得到231株突變體。發(fā)酵結(jié)果表明，沒有獲得1，3-PD高產(chǎn)突變株。確定了肺炎

4、克雷伯氏桿菌(Klebsiellapneumonia)M53的最優(yōu)發(fā)酵工藝為：采用微供氧發(fā)酵(0.2vvm的空氣，轉(zhuǎn)速為280rpm)，起始甘油和輔助底物蔗糖濃度分別為20g.1-1和5g.1-1。待底物消耗到1g.1-1時(shí)，開始流加補(bǔ)料，補(bǔ)料液中甘油-蔗糖質(zhì)量比為10/1。在此條件下，1，3-PD最高產(chǎn)出濃度達(dá)55.66g.l-1生產(chǎn)強(qiáng)度116g.l-1.h-1，摩爾轉(zhuǎn)化率37.4％。 利用構(gòu)建的乳酸缺失突變株M53(ldh-