1、大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是基因工程中應(yīng)用最廣泛的也是最有效的表達(dá)重組蛋白的系統(tǒng)。大腸桿菌是目前遺傳和生化背景最清晰的有機(jī)體，它良好的研究背景、易生長易操作的優(yōu)點(diǎn)使其成為表達(dá)外源蛋白的首選系統(tǒng)。用傳統(tǒng)方法難以制取的蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等新型藥物可以在大腸桿菌中大量表達(dá)生產(chǎn)。目前很多商品化的藥用蛋白如胰島素、干擾素、生長因子等都是用大腸桿菌系統(tǒng)生產(chǎn)的，占所有藥用蛋白的三分之一。 促紅細(xì)胞生成素(EPO)是由腎臟和肝臟分泌的能促進(jìn)紅細(xì)胞生成的激素

2、。利用基因工程研制成功的重組人紅細(xì)胞生成素(rhEPO)價格相對較低，用于治療腎性貧血取得了令人矚目的療效。干擾素-β(Interferon-β)是由成纖維細(xì)胞受病毒感染或IFN誘生所產(chǎn)生的一類具有生物活性的糖蛋白，能通過與靶細(xì)胞表面受體結(jié)合干擾人體內(nèi)病毒復(fù)制和繁殖，是一種臨床治療病毒性疾病和腫瘤的有效生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。 本實(shí)驗(yàn)對大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中宿主菌、質(zhì)粒和表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，選擇EPO和IFN-β作為目的蛋白。在宿主菌的選擇上

3、，用大腸桿菌入DE3溶原菌BL21(DE3)和能編碼表達(dá)少量T7溶菌酶的BL21(DE3)/pLys兩種菌株。載體在pET系列表達(dá)載體上中篩選。同時為消除稀有密碼子對表達(dá)的影響，目的蛋白EPO和IFN-β的基因用化學(xué)合成的方法得到。在表達(dá)條件的篩選上，用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)確定各種表達(dá)條件的影響。構(gòu)建成功的表達(dá)載體在宿主菌中誘導(dǎo)后，經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測，EPO和IFN-β表達(dá)量均在20％以上。正交試驗(yàn)結(jié)果分析后，選定0.8M IPTG、O