1、CD4輔助性T細(xì)胞的分化與疾病的關(guān)系是近年來的研究熱點(diǎn)。T細(xì)胞表現(xiàn)為功能上的異質(zhì)性，在不同的細(xì)胞因子、抗原呈遞細(xì)胞及抗原等因素的作用下，Th0前體細(xì)胞選擇性地向Th1或Th2細(xì)胞分化。Th1/Th2分化與多種疾病有關(guān)，如腫瘤患者出現(xiàn)典型的Th2漂移，哮喘等變態(tài)反應(yīng)性疾病表現(xiàn)Th2型，校正Th1/Th2細(xì)胞平衡，可為疾病的免疫治療提供新的手段。 T-bet主要表達(dá)于CD4輔助性T淋巴細(xì)胞，是Th1特異性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，因在Th1/T

2、h2分化中起著關(guān)鍵性的作用而越來越受到關(guān)注。在無致敏原刺激的情況下，T-bet單獨(dú)缺陷就能使小鼠引起氣道炎癥反應(yīng)。其一是因?yàn)門h2型細(xì)胞及細(xì)胞因子失去了T-bet的抑制后過量表達(dá)；其二是T-bet的表達(dá)缺陷導(dǎo)致Th1分化減少和Th1相關(guān)細(xì)胞因子減少，這也就導(dǎo)致Th2型細(xì)胞及細(xì)胞因子相對(duì)增多。T-bet介導(dǎo)細(xì)胞因子和己極化的Th2細(xì)胞變化，可能為治療過敏性疾病提供了條件。 Th特異性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子對(duì)細(xì)胞因子平衡有重要影響，但是對(duì)細(xì)胞

3、因子以后的一些事件的作用還不清楚。比如關(guān)于轉(zhuǎn)錄因子與CD23、嗜酸細(xì)胞陽離子蛋白(eosinophilecationicproteinECP)的關(guān)系還不清楚。變應(yīng)原誘導(dǎo)刺激對(duì)變態(tài)反應(yīng)性疾病患者轉(zhuǎn)錄因子的作用研究還很膚淺。變應(yīng)性鼻炎(allergicrhinitisAR)患者扁桃體、腺樣體和鼻黏膜中淋巴組織等鼻咽相關(guān)淋巴組織(nasopharyngeal-associatedlymphoidtissuesNALT)的T細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)

4、情況有待研究。研究變應(yīng)性鼻炎患者外周血和呼吸道黏膜淋巴組織T細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子對(duì)從系統(tǒng)免疫和局部黏膜免疫方面探討其發(fā)生機(jī)制有著重要意義。本研究的著眼點(diǎn)是通過體內(nèi)外變應(yīng)原的刺激，了解變應(yīng)性鼻炎患者外周血中Th1特異性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子T-bet、CD23、ECP的變化和它們之間的相互關(guān)系。用免疫組化染色法了解AR患者NALT中的T-bet表達(dá)特征和意義。 目的：探討AR患者外周血單核細(xì)胞(peripheralbloodmonoucle

5、arcellsPBMC)中轉(zhuǎn)錄因子T-bet表達(dá)及其與CD23、ECP以及過敏癥狀評(píng)分的關(guān)系；了解AR患者經(jīng)體內(nèi)外塵螨變應(yīng)原刺激后T-bet表達(dá)、CD23、ECP和過敏癥狀變化；同時(shí)了解T-bet在有AR和沒有AR的兩組人群的NALT中的表達(dá)特征和意義。 方法：采取15例健康人和60例確定為塵螨過敏的AR患者的外周血。36例患者PBMC經(jīng)50μg/ml塵螨變應(yīng)原體外培養(yǎng)刺激，另24例AR患者接受了1年的應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化塵螨變應(yīng)原的體內(nèi)

6、特異性免疫治療(specificimmunotherapySIT)。用半定量的逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscriptase-polymerasechainreactionRT-PCR)分析兩組PBMC中的T-betmRNA表達(dá)情況。在培養(yǎng)和SIT前后分別用流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometryFCM)和Unicap系統(tǒng)檢測患者CD19/CD23和ECP水平。分別用免疫組化單染色法檢測AR患者和非AR人群扁桃體腺樣體和鼻粘

7、膜中的T-bet表達(dá)，用免疫組化雙染色法檢測CD4/T-bet表達(dá)。SIT前后分別評(píng)估AR患者鼻部癥狀。 結(jié)果：塵螨變應(yīng)原體外刺激36例AR患者PBMC前后，其T-bet與β-actin表達(dá)水平平均比值分別為0.45±0.13和0.44±0.11，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.675，P=0.504)。24例AR患者PBMC前后，其T-bet與β-actin表達(dá)水平平均比值分別為0.44±0.14和0.49±0.09，差異有統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)意義(t=-2.324，P=0.029)。在對(duì)照組，該比值為0.59±0.09，顯著高于上述兩組(P=0.000)。ECP(μg/ml)和CD23(％)水平在對(duì)照組和AR組分別是4.67±1.34和25.58±17.22、5.99±2.44和13.53±5.41，P均小于0.01。42例單純AR患者和合并有哮喘的18例AR患者的T-bet、ECP、CD23和癥狀評(píng)分分別是0.49±0.12和0.33±0.09、22.45±17.28和

9、32.89±15.11、12.32±5.71和16.34±3.32、8.43±1.65和9.61±1.70，t分別是5.411、-2.224、-3.407和-2.526，各自P值分別是0.000、0.030、0.001和0.014。此外，上述4個(gè)指標(biāo)沒有性別之間的差異。 T-betmRNA表達(dá)強(qiáng)度與過敏癥狀無關(guān)(r=-0.214，P=0.101)。然而，T-bet分別與ECP和CD23存在負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.292，P=0.0

10、23，r=-0.260，P=0.045)。過敏癥狀評(píng)分、ECP和CD23之間存在正相關(guān)，P值均小于0.05。經(jīng)SIT后，ECP和CD23水平和癥狀評(píng)分均顯著下降(t值分別為4.633、6.036和10.798，P均小于0.01)。經(jīng)SIT后，T-betmRNA表達(dá)顯著上調(diào)(t=-2.324，P=0.029)。 在AR組扁桃體、腺樣體和鼻黏膜組織中T-bet表達(dá)陽性率高于非AR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，t值分別是4.038、3.860

11、和4.912，P值分別是0.044、0.049和0.027；AR組扁桃體T-bet表達(dá)不同年齡組之間存在差異(x2=7.079，P=0.029)，其中主要是成年組T-bet表達(dá)低于兒童組和青少年組；在非AR組人群扁桃體組織T-bet表達(dá)沒有年齡組之間的差異。兩組中扁桃體、腺樣體和鼻粘膜中均有CD4和T-bet表達(dá)，大多數(shù)T-bet陽性表達(dá)位于CD4+T細(xì)胞中。 結(jié)論 1.AR患者CD23和ECP水平高于非AR人群，但是T

12、-bet在AR患者的PBMC和NALT中的表達(dá)均下調(diào)。 2.AR患者經(jīng)SIT后，可以看到T-bet表達(dá)的上調(diào)和CD23以及ECP水平的下降。CD23和ECP的水平在一定程度上反應(yīng)了AR患者病情的嚴(yán)重程度。 3.Th1相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子T-bet的下調(diào)表達(dá)與AR患者系統(tǒng)和局部粘膜免疫Th1反應(yīng)低下有關(guān)；T-bet對(duì)變應(yīng)原體外反應(yīng)低下，在塵螨特異性變應(yīng)原體外刺激的變應(yīng)性鼻炎患者外周血單核細(xì)胞中，轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞因子的Th2優(yōu)勢不是由