1、納豆激酶(Nattokinase,NK)是由納豆芽孢桿菌[Bacill us subtilis(natto．var)]分泌產(chǎn)生的一種具有強(qiáng)烈纖溶作用的絲氨酸堿性蛋白酶。NK的纖溶機(jī)制為：①直接作用于交聯(lián)纖維蛋白，對(duì)纖維蛋白原不敏感，不易引起出血傾向；②能夠激活體內(nèi)t-PA，可以溫和、持續(xù)的發(fā)揮纖溶作用；③NK可水解纖溶酶原激活劑的1型抑制劑(PAI-1)，使其失活，PAI-1的失活可直接使纖溶作用增強(qiáng)。與目前臨床上常用的血栓治療藥物鏈激

2、酶(SK)、尿激酶(u-PA)、組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)等相比，納豆激酶具有溶栓效果明顯；不易引起出血，安全性能好；能抗胰酶水解，經(jīng)消化道吸收，不被破壞等優(yōu)點(diǎn)。因此，將納豆激酶開(kāi)發(fā)成新型口服溶栓藥將具有廣泛的市場(chǎng)前景。 本研究采用誘變育種的方法選育納豆激酶高產(chǎn)菌株；以紫外、微波為單因素分別對(duì)出發(fā)菌株BN3撐6進(jìn)行誘變，確定紫外誘變的最佳條件為40W紫外燈、30cm照射時(shí)間20s，此條件下致死率為98.4％、突變率0.7％

3、，該條件下誘變得到正突變株YSBN8、YSBN362；微波誘變最佳條件為菌懸液濃度10<'4>個(gè)/mL，作用時(shí)間5秒，此時(shí)致死率為99.2％，突變率為2.5％，該條件下得到正突變株YSBN411、YSBN467、YSBN484，YSBN497。相同培養(yǎng)條件下測(cè)得上述六突變株的產(chǎn)酶活性分別為出發(fā)菌株的128％、130％、118.7％，184.7％，143.3％和124.1％，其中YSBN467的固體發(fā)酵產(chǎn)酶活性為2200IU/g，是出發(fā)菌

4、株的1.84倍；對(duì)其連續(xù)傳代五次考察產(chǎn)酶能力差異，結(jié)果證明其遺傳性狀穩(wěn)定。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)還研究了誘變菌株的篩選方法——牛奶．瓊脂板法，該法在誘變選育納豆菌時(shí)能夠大大減少工作量，科學(xué)可行。 實(shí)驗(yàn)還對(duì)瓊脂粉、纖維蛋白平板法、纖維蛋白平板法、瓊脂糖-纖維蛋白平板法測(cè)定納豆激酶活性的特點(diǎn)進(jìn)行了比較研究；確定采用瓊脂粉-纖維蛋白平板法測(cè)定納豆激酶活性；該法具有溶圈明顯、易于測(cè)量、機(jī)械強(qiáng)度好、操作簡(jiǎn)便、成本低等優(yōu)點(diǎn)，適用于納豆菌的選育及納豆激酶

5、發(fā)酵工藝優(yōu)化中對(duì)納豆激酶的測(cè)定，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定該法的具體操作為：①瓊脂粉．纖維蛋白平板法Ⅰ：將自制纖維蛋白原溶液與1.2％瓊脂粉溶液分別置于55℃水浴中恒溫15min，等體積混合，迅速搖勻后倒平板，每板中倒入15mL；②瓊脂粉．纖維蛋白平板法Ⅱ：將自制纖維蛋白原溶液與等體積1.2％瓊脂粉溶液混合，共熱至沸，倒板。測(cè)定酶活的條件：取酶液10μl點(diǎn)板，25℃，放置16h，測(cè)量溶圈的垂直直徑并以直徑積表示溶圈面積。實(shí)驗(yàn)確定該法的測(cè)定下限為55I

6、U/mL，精確測(cè)定范圍為326.6～2200(IU/mL)。本實(shí)驗(yàn)研究了突變菌株YSBN467的最適液體發(fā)酵產(chǎn)酶條件，單因素考察后設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，確定了該菌株的最適搖床發(fā)酵條件為：麥芽糖1％，大豆蛋白胨2％，CaCl<,2>、K<,2>HPO<,4>、KH<,2>PO<,4>各0.02％；接種量4％，溫度為30℃，初始pH為6.5，培養(yǎng)基裝液量為20mL(/100mL三角瓶)，接種量4％，搖床轉(zhuǎn)速為120r/min。在最適搖床發(fā)酵條件下，