1、納豆激酶(nattokinase,NK)是由納豆芽孢桿菌(Bacillus subtilis Natto)產(chǎn)生的一種具有纖溶蛋白活性的堿性絲氨酸蛋白酶,具有安全高效、體內(nèi)半衰期長、沒有出血傾向等特點,能顯著溶解體內(nèi)外血栓,明顯縮短優(yōu)球蛋白的溶解時間(ELT),并能激活靜脈內(nèi)皮細胞產(chǎn)生纖維蛋白溶酶原激活劑(t-PA),因此,納豆激酶成為當(dāng)前溶栓藥物最有發(fā)展?jié)摿Φ纳镏破分?。目前多?shù)廠家采用液體發(fā)酵工藝和下游分離提取技術(shù)來生產(chǎn)納豆激酶,并

2、且多數(shù)處于實驗室水平,生產(chǎn)能力較低。近年來,由于固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)模式在酶制劑生產(chǎn)等方面展現(xiàn)出來的優(yōu)勢,使得采用固態(tài)發(fā)酵的方式生產(chǎn)納豆激酶具有一定現(xiàn)實意義。
　　本文以前期篩選的高產(chǎn)納豆激酶菌株為發(fā)酵菌種,在單因素試驗的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法(response surface methodology,RSM)和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(artificial neural network,ANN)結(jié)合遺傳算法對納豆激酶固態(tài)發(fā)酵的工藝參數(shù)進行了優(yōu)化,并對

3、兩種不同設(shè)計方法進行了分析比較,最終確定出了最佳的產(chǎn)酶方案:接種量4％,初始含水量55%,大豆裝量90g/250mL,發(fā)酵溫度36.09℃,蔗糖添加量1.5%,MgSO4·7H2O添加量0.21%,CaCl2添加量0.27%,發(fā)酵時間24h。在該條件下發(fā)酵產(chǎn)物的最大酶活可達7631.28U/g,較單因素試驗的最高水平提高了29.02%,其中發(fā)酵培養(yǎng)基中MgSO4·7H2O添加量和CaCl2添加量的交互效應(yīng)對納豆激酶酶活影響最為顯著。采用

4、真空冷凍干燥工藝及后處理操作獲得納豆凍干粉,針對納豆凍干粉生產(chǎn)中的冷凍干燥、粉碎方式等工藝過程對酶活的影響進行了研究,這些研究工作可為優(yōu)化納豆凍干粉生產(chǎn)過程和后期開發(fā)劑型的選擇提供技術(shù)支持。同時對納豆凍干粉在模擬胃腸環(huán)境中的變化進行了測定,并對其主要成分和生物活性物質(zhì)進行了測定分析,通過分析發(fā)現(xiàn)經(jīng)發(fā)酵后的納豆制品從營養(yǎng)和生物活性物質(zhì)含量兩方面都要高于原料大豆粉,因此納豆凍干粉可作為一種很有潛力的保健制品進行開發(fā)。采用藥劑學(xué)中的加速儲存穩(wěn)