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![脂多糖(LPS)誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞MicroRNA表達(dá)的初步篩選.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/19/12/c7dd8507-47e6-43eb-8b54-71b3863b0c4f/c7dd8507-47e6-43eb-8b54-71b3863b0c4f1.gif)
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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
應(yīng)用基因芯片來檢測(cè)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的MicroRNA的表達(dá)情況,并初步篩選出特異表達(dá)的MicroKNA。
方法:
本實(shí)驗(yàn)分兩個(gè)階段:
第一階段:選取兩株細(xì)胞分別為Jurkat細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)、CCRF-CEM細(xì)胞(人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞)。首先將兩株細(xì)胞培養(yǎng)到成熟階段,每種細(xì)胞接種四個(gè)培養(yǎng)皿,每種細(xì)胞其中兩個(gè)培養(yǎng)皿加入1ug LPS進(jìn)行藥物刺
2、激,另外兩個(gè)培養(yǎng)皿作為空白對(duì)照,藥物刺激8小時(shí)后,分別收集每個(gè)培養(yǎng)皿細(xì)胞,之后分別提取每個(gè)培養(yǎng)皿中細(xì)胞表達(dá)的RNA。
第二階段:將提取到的RNA做芯片分析,得到每種細(xì)胞的microRNA的表達(dá)譜,并對(duì)比同種細(xì)胞LPS刺激與未刺激的microRNA的變化,找出刺激組與正常組表達(dá)有明顯差異的microRNA。
結(jié)果:
1.芯片結(jié)果顯示,Jurkat細(xì)胞株中LPS干預(yù)組與未干預(yù)組細(xì)胞株相比,未見表達(dá)有
3、明顯差異的microRNA。
2.芯片結(jié)果顯示,CCRF-CEM細(xì)胞株中LPS干預(yù)組與未干預(yù)組相比,microRNA-7-1的表達(dá)下調(diào)明顯,Log2(G2/G1)值為-0.41(p<0.05);
結(jié)論:
通過LPS刺激體外培養(yǎng)CCRF-CEM和Jurkat細(xì)胞,初步篩選出可能參與調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞炎癥免疫應(yīng)答的microRNA。如:miR-7-1。
miR-7-1的在LPS刺激CCRF-
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