1、利用固定化酵母催化一磷酸腺苷(AMP)磷酸化生成三磷酸腺苷(ATP)是最有工業(yè)前景的ATP生產(chǎn)方法之一。該法的中心內(nèi)容包括：穩(wěn)定的細(xì)胞質(zhì)量、適宜的固定化形式、適宜的反應(yīng)操作條件等。本文對(duì)酵母的培養(yǎng)條件、開孔明膠固定化細(xì)胞的制備條件以及ATP生產(chǎn)的反應(yīng)條件進(jìn)行了較深入的探討和試驗(yàn)研究。此外還建立了ATP分離與提純的實(shí)驗(yàn)方法，并通過實(shí)驗(yàn)考察了發(fā)酵液的ATP回收率、成品ATP的純度以及ATP的實(shí)際產(chǎn)率。 首先選用了一株轉(zhuǎn)化率較好但穩(wěn)

2、定性差的酵母菌株，對(duì)擴(kuò)培培養(yǎng)基中的蔗糖蜜、蛋白胨、(NH<,4>)<,2>SO<,4>KH<,2>PO<,4>四種因素不同濃度水平進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，研究其對(duì)培養(yǎng)酵母菌濃及ATP轉(zhuǎn)化活性的影響，確定了用于ATP生產(chǎn)的酵母細(xì)胞培養(yǎng)工藝的較佳配方，其結(jié)果為：m(蔗糖蜜)＝120％，m(蛋白胨)＝0.70％，m(KH<,2>PO<,4>)=0.15％，m((NH<,4>)<,2>SO<,4>)＝0.25％。實(shí)驗(yàn)還確定了該啤酒酵母適宜的擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)間是

3、14～20小時(shí)。 研究了開孔明膠固定化啤酒酵母細(xì)胞的制備條件，結(jié)果表明15％的明膠和2％的海藻酸鈉形成的復(fù)配膠包埋10％的啤酒酵母細(xì)胞制備成的固定化顆粒經(jīng)2％戊二醛交聯(lián)1小時(shí)具有較高的磷酸化活性。 利用該固定化顆粒研究了酵母酶系生產(chǎn)ATP的反應(yīng)機(jī)理，考察了多種因素對(duì)ATP轉(zhuǎn)化情況的影響，結(jié)果表明用開孔明膠包埋啤酒酵母制成的固定化細(xì)胞，在含有15g/LAMP，葡萄糖150mmol/L，硫酸鎂16mmol/L，pH7.0