1、牛結(jié)核病主要是由牛分枝桿菌(Mycobacterium bovis，MTB) 引起的一種人獸共患傳染病，它嚴(yán)重危害人的健康和畜牧業(yè)的發(fā)展，且導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，對牛結(jié)核病的防控顯得格外的重要。然而，缺乏可用于檢測結(jié)核桿菌的特應(yīng)性靶標(biāo)分子及用于研制有效疫苗的候選分子是結(jié)核病防治面臨的棘手問題，因此，發(fā)掘這些重要分子就成了結(jié)核病防治研究的熱點(diǎn)。分泌蛋白是目前研究較多的結(jié)核桿菌特異性抗原，本實(shí)驗(yàn)篩選出Mb1761c和Mb2277兩個(gè)分泌

2、蛋白，在利用生物信息學(xué)方法對其信號肽和疏水跨膜區(qū)進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上，通過實(shí)驗(yàn)生物學(xué)方法，對其表達(dá)免疫原性進(jìn)行了驗(yàn)證。本研究主要分為以下兩個(gè)方面的內(nèi)容： （1）牛分枝桿菌Mb1761c和Mb2277蛋白的免疫原性的初步研究。根據(jù)GenBank提供的Mb1761c和Mb2277的基因序列設(shè)計(jì)引物，通過PCR方法擴(kuò)增出目的基因，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，原核誘導(dǎo)表達(dá)后，利用Western-Blot對表達(dá)產(chǎn)物的免疫原性進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明目的蛋白具

3、有較強(qiáng)的免疫原性，從而為進(jìn)一步研究其亞單位疫苗及ELISA檢測方法提供了候選蛋白。 （2）重組蛋白在ELISA檢測方法中的初步應(yīng)用研究。將篩選得到的兩個(gè)具有較強(qiáng)免疫原性的蛋白分子Mb1761c和Mb2277作為抗原，分別進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明Mb2277的靈敏性較強(qiáng)。將兩個(gè)蛋白按照不同比例混合作為包被抗原，結(jié)果顯示將兩種重組蛋白按1：1混合包被，ELISA的靈敏度高于單個(gè)抗原包被的。 本研究篩選鑒定了分枝桿菌兩個(gè)具