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![紅皮云杉體細(xì)胞胚形成及不定芽誘導(dǎo).pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/8/d57b82ee-1d5d-4090-9f50-d3cd1d0efd87/d57b82ee-1d5d-4090-9f50-d3cd1d0efd871.gif)
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文檔簡介
1、紅皮云杉材質(zhì)優(yōu)良、干形通直、生長較快、適應(yīng)性強(qiáng)、是營造用材林、防護(hù)林及庭院綠化的優(yōu)良樹種,具有較高的經(jīng)濟(jì)、生態(tài)和美學(xué)價值。近年來,我國東北林區(qū)大力發(fā)展和營造紅皮云杉人工林,大興安嶺林區(qū)紅皮云杉每年造林占總面積的5%,十年后將上升到20%左右,其造林面積將超過落葉松,是一個具有廣闊前途的優(yōu)良樹種。但紅皮云杉天然林現(xiàn)在只是呈小塊狀的零星分布的狀態(tài)而且還有進(jìn)一步萎縮的趨勢,一些優(yōu)質(zhì)的種質(zhì)資源損失嚴(yán)重,優(yōu)質(zhì)種子園建設(shè)還沒有形成生產(chǎn)力,優(yōu)良無性系
2、選造規(guī)模較小,現(xiàn)營造的人工林多為未經(jīng)過測定的天然林、人工林中采收種子后繁育的種苗。優(yōu)良種質(zhì)資源的保護(hù)、保存、繁育工作較為滯后。大大落后于西方發(fā)達(dá)國家的同類樹種如歐洲云杉、黑云杉、白云杉等的研究水平,也比國內(nèi)其他樹種晚得多。因此對紅皮云杉體細(xì)胚形成和不定芽誘導(dǎo)顯得急為迫切,它不僅可以解決優(yōu)良苗木繁育和種質(zhì)資源保存等問題,而且也可以為基因工程技術(shù)研究等打下基礎(chǔ)。我們對紅皮云體細(xì)胞胚形成和不定芽誘導(dǎo)技術(shù)進(jìn)行研究的結(jié)果如下:
以紅皮云
3、杉的7月20日采集的未成熟全胚作為外植體,在暗培養(yǎng)、22℃條件下,在附加0.46mg·L-1BA、0.53 mg·L-1KT、3.07 mg·L-1NAA、20g·L-1蔗糖,450mg·L-1 L-谷氨酰胺、750mg·L-1水解酪蛋白、2 g·L-1凝膠(Gelrite)的改良RJW基本培養(yǎng)基上可獲得最好的胚性愈傷組織誘導(dǎo)效果,平均誘導(dǎo)率可達(dá)81.27%。遺傳基礎(chǔ)對胚性愈傷組織誘導(dǎo)影響顯著。紅皮云杉在保持增殖階段在附加5g·L-1肌
4、醇、0.21mg·L-1BA、0.20 mg·L-1KT、1.85mg·L-1NAA的改良RJW基本培養(yǎng)基上,以固體/濾紙交替培養(yǎng)的方式增殖率、增殖量最高,胚性愈傷組誘導(dǎo)率與增殖率和增殖量之間存在強(qiáng)烈的正相關(guān)。隨著繼代次數(shù)增加增殖率和增殖量逐漸下降,不同的細(xì)胞系下降的速率不相同。在球狀胚誘導(dǎo)階段以不加任何激素的改良RJW附加15 g·L-1肌醇和3g·L-1的活性碳對球狀胚誘導(dǎo)效果最好為97.6個/g。遺傳基礎(chǔ)不同的三個細(xì)胞系對中等濃度
5、的肌醇和活性碳的反應(yīng)是一致的。在紅皮云杉體細(xì)胞胚成熟的培養(yǎng)階段以改良的RJW基本培養(yǎng)基附加7.5mg·L-1ABA、40g·L-1蔗糖、20g·L-1PEG4000、1.76mg·L-1維生素C。在此培養(yǎng)基上3#、2#和9#細(xì)胞系的成熟率分別達(dá)到45、65和15個/g,平均為41.7個/g。AgNO3不僅沒有促進(jìn)紅皮云體細(xì)胞胚的有效分劃,而且還起到了抑制作用。在體胚萌發(fā)轉(zhuǎn)換階段以改良1/2RJW培養(yǎng)基附加3g·L-1活性碳的萌發(fā)率最高,
6、最高的萌發(fā)率為88.5%。轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基以1/2BMI為最適宜,干燥期為8天時轉(zhuǎn)換效果最好,平均轉(zhuǎn)換率達(dá)18.0%。
在紅皮云不定芽誘導(dǎo)技術(shù)研究過程中以8月3日采集的未成熟胚在附加0.2 mg·L-1BA、0.4 mg·L-12,4-D的SH培養(yǎng)基上,在光照、22℃條件下,不定芽愈傷組織誘率最高。在誘導(dǎo)不定芽分化階段以附加0.2 mg·L-1BA、0.2 mg·L-12,4-D的SH培養(yǎng)基,無論在不定芽分化頻率還是不定芽個數(shù)都是最
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