1、目的：研究供體肝臟NK細(xì)胞在同種異體大鼠肝臟移植中的作用，以及比較外周血中淋巴細(xì)胞亞群的變化，初步探索供肝NK細(xì)胞在肝移植免疫中的可能機(jī)制。
　　 方法：運(yùn)用改良“二袖套”法建立大鼠肝移植模型，以Lewis-BN近交系大鼠為急性排斥組，BN-Lewis近交系大鼠為天然耐受組，并應(yīng)用Co60射線照射清除供體免疫細(xì)胞及經(jīng)門靜脈供肝NK細(xì)胞回輸?shù)燃夹g(shù)，設(shè)立6個(gè)大組：A.天然耐受組(BN-Lewis)；B.BN-Lewis+供體Co60

2、照射(Co60-BN-Lewis)；C.BN-Lewis+供體Co60照射+受體門靜脈輸注供肝NK細(xì)胞(Co60-BN-Lewis+donor NK cells)；D.急性排斥組(Lewis-BN)；E.Lewis-BN+供體Co60照射(Co60-Lewis-BN)，F(xiàn).Lewis-BN+供體Co60照射+受體門靜脈輸注供肝NK細(xì)胞(Co60-Lewis-BN-donor NK cells)。根據(jù)不同觀察時(shí)間點(diǎn)分別于術(shù)后1、3、7天切

3、取移植肝用于病理學(xué)分析，同時(shí)收集外周血，血清用于檢測肝功能指標(biāo)、IL-2水平，全血行流式檢測淋巴細(xì)胞亞群情況。另外設(shè)亞組觀察移植后一般情況和自然存活時(shí)間。
　　 結(jié)果：BN-Lewis耐受組中，B、C組平均存活時(shí)間較A組縮短，但3組間差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；3組中，A組術(shù)后一般情況恢復(fù)最好，移植相關(guān)并發(fā)癥發(fā)生率最低，C組其次，B組最差，其中B組并發(fā)癥發(fā)生率與A組、C組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Lewis-

4、BN排斥組中，E、F組平均存活時(shí)間較D組明顯縮短，3組間兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；3組中，D組術(shù)后一般情況恢復(fù)最好，移植相關(guān)并發(fā)癥發(fā)生率最低，F(xiàn)組其次，E組最差，其中E組并發(fā)癥發(fā)生率與D組、F組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 回輸供肝NK細(xì)胞移植組術(shù)后血清轉(zhuǎn)氨酶升高，于術(shù)后第3天達(dá)到峰值，之后開始下降。未行NK細(xì)胞輸注的其他移植組中，均未見術(shù)后第3天的肝功能破壞現(xiàn)象。與之相應(yīng)，回輸供肝NK細(xì)胞組引起移植

5、術(shù)后膽紅素的升高，變化趨勢與其他移植組別相似，都呈逐漸上升趨勢，但F組術(shù)后第7天升高幅度較其他組別明顯。
　　 移植肝組織Banff標(biāo)準(zhǔn)評分：各組的排斥反應(yīng)有一相似的趨勢，隨移植后時(shí)間延長，急性排斥反應(yīng)加重。術(shù)后第7天，各組排斥反應(yīng)均達(dá)到高峰。耐受組中，B組排斥反應(yīng)最重，其余兩組為中度排斥；排斥組中，E組和F組為重度排斥，D組為中度排斥反應(yīng)。
　　 回輸供肝NK細(xì)胞引起CD4+CD25+Treg比例升高：耐受組中，C組第

6、3、7天與A組、B組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比，該比例均明顯升高。排斥組中，F(xiàn)組第7天與D組、E組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比，該比例均明顯升高。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 回輸供肝NK細(xì)胞引起受體CD3+CD8+T細(xì)胞比例下降：耐受組中，第1、7天C組與A組，第7天C組與B組相比，CD3+CD8+T細(xì)胞比例比例明顯下降。排斥組中，第7天F組與D組，第3、7天F組與E組相比，該比例明顯下降。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)?；剌敼└蜰K

7、細(xì)胞引起受體CD3+CD4+/CD3+CD8+T細(xì)胞比值升高與受體CD3+CD8+T細(xì)胞比例下降的趨勢呈反方向一致性。
　　 回輸供肝NK細(xì)胞下調(diào)血清IL-2水平：耐受組中，第3、7天C組與B組比較，血清IL-2水平明顯降低。排斥組中，第7天F組與E組比較，血清IL-2水平明顯下降。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)?；剌敼└蜰K細(xì)胞移植組與相應(yīng)的清除供肝免疫細(xì)胞的移植組，血清IL-2水平的降低與外周血CD4+CD25+Treg

8、比例的升高呈反方向一致性。
　　 結(jié)論：
　　 1.供肝NK細(xì)胞能減輕肝移植術(shù)后早期的急性排斥反應(yīng)，從而延長受鼠遠(yuǎn)期存活時(shí)間或提高遠(yuǎn)期存活率，且可以改善移植術(shù)后生存質(zhì)量及促進(jìn)術(shù)后一般情況恢復(fù)，減少并發(fā)癥的發(fā)生率。
　　 2.供肝NK細(xì)胞通過上調(diào)CD4+CD25+Treg比例來減輕移植肝淋巴細(xì)胞浸潤、降低CD3+CD8+T細(xì)胞比例及移植物內(nèi)IL-2水平，在肝臟移植免疫中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，從而下調(diào)受體細(xì)胞免疫水平，減輕早