1、目的:原發(fā)性喉癌指原發(fā)部位在喉部的腫瘤，以鱗狀細胞癌(90％)最為常見。喉癌治療包括手術、放療和化療等多種治療方法。根據(jù)病情的分期可選擇一種，或多種方法相結(jié)合的治療方式。環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)，是催化花生四烯酸合成前列腺素(Prostaglandin，PG)過程中的關鍵酶，在體內(nèi)存在COX-1和COX-2兩種同工酶。近年來大量研究表明COX-2在多種腫瘤中都存在異常增高表達，在其發(fā)病過程中發(fā)揮著重要

2、作用。關于COX-2在腫瘤中的作用機制，目前研究表明其可以通過多種途徑作用于腫瘤發(fā)病過程。前期實驗[1]已經(jīng)證實選擇性COX-2抑制劑尼美舒利(nimesulide，NIM)可以通過誘導細胞凋亡，抑制細胞增殖的途徑抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤生長。本實驗進一步就NIM對喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤微血管密度(Microvessel density，MVD)、COX-2、血管生成因子-2(Angiopoietin-2，Ang-2

3、)和堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblastgrowth factor, bFGF)表達的影響進行觀察和研究，以期進一步為NIM用于喉鱗癌的治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:粱灼萍[1]等在前期試驗中，將喉鱗癌Hep-2細胞接種于裸鼠背部皮下，建立移植瘤模型。將裸鼠隨機分為實驗組和對照組各六只，實驗組予裸鼠腹腔注射NIM(50mg/kg/2d，0.2ml);對照組予裸鼠腹腔注射0.2ml生理鹽水。用藥4周后，處死裸

4、鼠并獲得瘤體。本實驗選用粱灼萍實驗所獲得的喉癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤，運用免疫組織化學技術檢測CD31在喉癌裸鼠移植瘤組織中表達來定位瘤體中的MVD，運用圖像分析系統(tǒng)作平均光密度值測定，并比較兩組間的差異;分別采用免疫組織化學染色技術檢測喉癌裸鼠移植瘤組織中COX-2、Ang-2和bFGF蛋白的表達情況，運用圖像分析系統(tǒng)計算平均光密度值并比較實驗組與對照組中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表達情況;采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(rev

5、erse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)方法檢測喉癌移植瘤組織中COX-2，Ang-2和bFGF mRNA的表達，并對兩組移植瘤組織中COX-2、Ang-2和bFGF mRNA灰度值進行比較;運用直線相關分別分析實驗組中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表達水平與MVD值的相關性。
　　 結(jié)果:(1)免疫組織化學SP法檢測裸鼠移植瘤中CD31表達得到平均MVD值，

6、實驗組為12.83±3.06，與對照組25.50±4.85(t=-5.412，P＜0.05)相比有統(tǒng)計學意義，表明選擇性COX-2抑制劑NIM干預后移植瘤內(nèi)血管生成減少;(2)利用免疫組織化學SP法檢測裸鼠移植瘤組織中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表達，實驗組中COX-2蛋白表達光密度為(38.12+15.56)，與對照組(140.92±23.12)比較顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(t=-9.825，P＜0.05)，實驗組Ang-2

7、蛋白表達為(49.02±7.67)，經(jīng)統(tǒng)計學分析與對照組(110.04±6.76)比較差異有統(tǒng)計學意義(t=-14.607，P＜0.05);實驗組bFGF蛋白表達為(62.25±7.50)，經(jīng)統(tǒng)計學分析與對照組(119.04±17.30)比較差異有統(tǒng)計學意義(t=-7.391，P＜0.05);(3)運用RT-PCR技術檢測移植瘤中COX-2、Ang-2和bFGF mRNA表達，NIM治療組COX-2 mRNA表達為(0.70±0.18)

8、，對照組為(2.20±0.38)，經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(t=-9.825，P＜0.05); NIM治療組Ang-2 mRNA灰度值為(0.49±0.03)，對照組為(0.98±0.10)，經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(t=-11.509，P＜0.05); NIM治療組移植瘤中bFGFmRNA表達為(0.65±0.08)，對照組為(1.19±0.19)，經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(t=-6.209，P＜0.05)。(4)相關性分

9、析:運用直線相關分析方法分別檢測實驗組移植瘤組織中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表達水平與MVD相關性，經(jīng)統(tǒng)計學分析存在相關性，其相關系數(shù)r分別為0.832，0.944，0.844（P均＜0.05）。
　　 結(jié)論:(1)選擇性COX-2抑制劑NIM可以抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤中血管生成;(2)實驗組中COX-2、Ang-2、bFGF蛋白表達水平分別與MVD表達水平呈正相關，后兩者為血管生成促進因子，其與MVD的