1、目的：采用大鼠慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎損傷(chronic constriction injuryCCI)建立慢性神經(jīng)病理性疼痛模型。 1．觀察CCI大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表達(dá)，研究脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞是否參與脊髓水平神經(jīng)病理性疼痛傷害性信息的整合及其時(shí)程變化特征。 2．觀察米諾環(huán)素對(duì)CCI大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物膠質(zhì)原纖維酸性蛋白

2、(glial fibrillary acidic protein，GFAP)表達(dá)的影響，探討米諾環(huán)素對(duì)慢性神經(jīng)病理性疼痛的作用效應(yīng)及可能的機(jī)制。 方法：根據(jù)Bennett-Xie(1988)所述建立CCI模型。健康SD雄性大鼠75只隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組(A組，n=10)；假手術(shù)組(B組，n=15)，B組大鼠僅分離暴露坐骨神經(jīng)，不行坐骨神經(jīng)結(jié)扎，余操作同C組；CCI對(duì)照組(C組，n=15)，C組大鼠在坐骨神經(jīng)結(jié)扎損傷手術(shù)前1個(gè)

3、小時(shí)，腹腔沒(méi)有注射米諾環(huán)素，而給予與D組注射米諾環(huán)素(40mg/kg)相同體積的生理鹽水，每24h注射一次，連續(xù)注射14天；CCI預(yù)給藥組(D組，n=15)D組大鼠在坐骨神經(jīng)結(jié)扎損傷手術(shù)前1個(gè)小時(shí)，腹腔注射米諾環(huán)素40mg/kg，每24h注射一次，連續(xù)注射到CCI術(shù)后14天；CCI治療組(E組，n=20)，E組大鼠行坐骨神經(jīng)結(jié)扎損傷手術(shù)，在確定慢性神經(jīng)病理性疼痛模型建立成功之前僅注射與D組注射米諾環(huán)素(40mg/kg)相同體積的生理鹽水

4、，每24h注射一次，而在確定大鼠慢性神經(jīng)病理性疼痛模型CCI建立成功后，腹腔開(kāi)始注射米諾環(huán)素(40mg/kg)，每24h注射一次，連續(xù)注射到14天為止。分別測(cè)定各組在手術(shù)前(以第Od表示)以及手術(shù)后第1d、4d、7d、11d、14d損傷側(cè)后肢機(jī)械刺激縮足閾值，然后相應(yīng)分別取每組大鼠L<,4-6>段脊髓。采用免疫組化染色方法測(cè)定脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)表達(dá)。 結(jié)果： 1．五組大鼠手術(shù)前基礎(chǔ)50﹪機(jī)

5、械刺激縮足閾值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.5)。A組、B組這二組大鼠各觀測(cè)時(shí)點(diǎn)損傷側(cè)50﹪機(jī)械刺激縮足閾值組內(nèi)及組間比較也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.5)。C組、D組、E組大鼠CCI術(shù)后第1d、4d、7d、11d、14d損傷側(cè)50﹪機(jī)械刺激縮足閾值分別與術(shù)前比較均有不同程度降低(P<0.05或P<0.01)；尤以C組、E組大鼠在CCI術(shù)后14d損傷側(cè)50﹪機(jī)械刺激縮足閾值顯著降低(P<0.01)。其中D組大鼠與C組、E組術(shù)后各觀測(cè)時(shí)點(diǎn)分別比較，50

6、﹪機(jī)械刺激縮足閾值明顯升高(P<0.01)。E組大鼠在確定慢性神經(jīng)病理性疼痛模型CCI建立成功注射米諾環(huán)素后， CCI術(shù)后第7d、11d、14d與C組各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)比較損傷側(cè)50﹪機(jī)械刺激縮足閾值有明顯增高(P<0.05)。 2．免疫組化染色結(jié)果顯示五組大鼠手術(shù)前脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度基礎(chǔ)值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.5)；A組、B組這二組大鼠各觀測(cè)時(shí)點(diǎn)GFAP免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值組內(nèi)及組間比較無(wú)統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)差異(P>0.5)。C組、D組、E組大鼠CCI術(shù)后第4d、7d、11d、14d損傷側(cè)GFAP免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值與術(shù)前比較均有不同程度升高(P<0.05或P<0.01)，尤以C組、E組大鼠在CCI術(shù)后14d損傷側(cè)GFAP免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值顯著增高(P<0.01)；其中D組與C組、E組CCI術(shù)后第4d、7d、11d、14d分別比較， GF-AP免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值均明顯降低(P<0.01)；E組大鼠在確

8、定慢性病理性疼痛模型CCI建立成功注射米諾環(huán)素后， CCI術(shù)后第7d、11d、14d與C組各相應(yīng)時(shí)點(diǎn)比較GFAP免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值有明顯降低(P<0.05)。 結(jié)論: 1．CCI大鼠可以出現(xiàn)不同時(shí)程的痛覺(jué)過(guò)敏，CCI術(shù)后中期脊髓的星形膠質(zhì)細(xì)胞被激活，其激活增高程度與慢性神經(jīng)病理性疼痛維持過(guò)程中機(jī)械刺激縮足閾值降低程度平行。 2．米諾環(huán)素的術(shù)前給藥能明顯降低脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活，從而更為有效減輕CCI