1、心律失常是常見(jiàn)的死亡和致殘?jiān)?，大約占所有自然死亡人群的11％。隨著社會(huì)老齡化的加重，惡性心律失常和猝死已經(jīng)成為影響民眾健康的一個(gè)重要因素。正常心臟電活動(dòng)的關(guān)鍵分子基礎(chǔ)是離子通道。由離子通道結(jié)構(gòu)、功能的改變所致的疾病稱為離子通道病，其中以心臟鈉離子通道疾病最為引人注目。心臟鈉通道a亞單位基因(SCN5A)負(fù)責(zé)心臟動(dòng)作電位的快速除極，在控制正常心律的興奮、傳導(dǎo)和維持中起著關(guān)鍵作用。大量研究證實(shí)SCN5A基因與多種猝死性的原發(fā)性心電疾病相關(guān)

2、，包括長(zhǎng)QT綜合征3型(LQT3)、Brugada綜合征及心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)疾病等?；谕换蛏系耐蛔兛梢鹑绱硕嗟呐R床表型，最近有人提出了“SCN5A疾病”的概念。 單核苷酸多態(tài)性(SNPs)是指基因組水平上由單個(gè)核苷酸變異所引起的DNA序列多態(tài)性，其最低的等位基因頻率需大于或等于1％.隨著對(duì)疾病遺傳基礎(chǔ)研究的深入，研究發(fā)現(xiàn)SNPs不僅可以作為遺傳標(biāo)記，而且通過(guò)基因調(diào)節(jié)能影響個(gè)體在生理、藥理和病理上的表現(xiàn)差異，甚至導(dǎo)致個(gè)體對(duì)疾病的

3、不同易感性，如囊腫性纖維化、阿爾茨海默病及心血管疾病等。最近一系列研究發(fā)現(xiàn)SCN5A基因的多態(tài)位點(diǎn)能夠影響鈉通道的生物物理行為，增加心律失常的易感性。目前國(guó)際上SCN5A基因SNPs的研究資料大多來(lái)自歐美和日本等國(guó)家，國(guó)內(nèi)尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。 本研究首次在中國(guó)南方漢族人群中進(jìn)行SCN5A基因篩查及遺傳學(xué)分析，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究SNPs與遺傳性心律失常(以Brugada綜合征為例)和獲得性心律失常的相關(guān)性，旨在了解中國(guó)漢族人群中SC

4、N5A基因多態(tài)性分布特征，找到與心律失常相關(guān)的高危SNPs位點(diǎn)。我們共收集無(wú)關(guān)健康中國(guó)南方漢族人群的外周血120份，用常規(guī)鹽析法抽提外周血DNA，PCR擴(kuò)增后應(yīng)用Big-Dye熒光標(biāo)記末端終止測(cè)序法篩查SCN5A基因編碼區(qū)、3'側(cè)翼區(qū)(3'-UTR)及各外顯子剪接位點(diǎn)區(qū)的多態(tài)位點(diǎn)并確定其基因型。根據(jù)最大期望值法估算各位點(diǎn)的配對(duì)不平衡連鎖和單體型頻率，結(jié)果如下：在中國(guó)南方漢族人群中共檢測(cè)到5個(gè)SNPs，其中有3個(gè)位點(diǎn)G87A(A29A)，

5、4245+82A＞G和G6174A是新發(fā)現(xiàn)的SNPs，各位點(diǎn)基因型頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡，其中4245+82A＞G與C5457T，4245+82A＞G與G6174A，C5457T與G6174A間呈強(qiáng)連鎖不平衡(D'＞0.8)。各多態(tài)位點(diǎn)在基因中呈不均勻分布，3個(gè)位于編碼區(qū)，1個(gè)位于3'-UTR，及1個(gè)位于intron23鄰接供體剪接位點(diǎn)的區(qū)域。各位點(diǎn)等位基因頻率分別為G87A(A29A)27.5％，A1673G(

6、H588R)10.4％，4245+82A＞G32.8％，C5457T(D1819D)41.3％和G6174A44.9％。其中A1673G和C5457T已在美國(guó)和日本報(bào)道過(guò)，A1673G(H588R)的基因頻率在中國(guó)南方漢族人群、日本人群和美國(guó)人群之間無(wú)顯著差異，C5457T(D1819D)在中國(guó)南方漢族人群和日本人群中的分布非常接近，但都明顯高于美國(guó)人群中的分布。各SNP在不同性別間的分布無(wú)顯著差異。 本研究共收集Brugada

7、綜合征病人樣本48份，包括36個(gè)先證者和12個(gè)散發(fā)病例，均為漢族，來(lái)自中國(guó)南方地區(qū)。臨床上根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)診斷Brugada綜合征，包括有反復(fù)暈厥發(fā)作或猝死家族史，典型的右束支傳導(dǎo)阻滯和V1-3導(dǎo)聯(lián)ST段抬高的心電圖表現(xiàn)，無(wú)器質(zhì)性心臟病或LQT。排除缺血、代謝或電解質(zhì)紊亂導(dǎo)致的ST段抬高。對(duì)樣本外周血DNA進(jìn)行SCN5A基因突變和多態(tài)位點(diǎn)檢測(cè)，在48份Brugada綜合征樣本中找到Brugada綜合征相關(guān)的SCN5A基因移碼突變4087in

8、sC，位于第22號(hào)外顯子。4087insC是國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)的Brugada綜合征相關(guān)的基因突變位點(diǎn)。該突變?cè)贐rugada綜合征家系譜中分布呈常染色體顯性遺傳規(guī)律。已檢測(cè)的5個(gè)SNPs在Brugada綜合征病人中的等位基因頻率分別為G87A(A29A)25.0％，A1673G(H588R)26.1％，4245+82A＞G25.0％，C5457T(D1819D)54.2％和G6174A58.3％。其中A1673G在正常對(duì)照組與Brugada

9、綜合征患者之間的分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，等位基因G1673在Brugada綜合征患者中的分布顯著升高，但該位點(diǎn)的基因型頻率在Brugada綜合征患者和正常人群之間無(wú)顯著差異。其余4個(gè)多態(tài)位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率在病例組和對(duì)照組之間也無(wú)顯著差異。 為了進(jìn)一步了解SCN5A基因SNPs與心律失常之間的相關(guān)性，我們共收集了自2002年12月～2004年1月在浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科因心律失常住院病人78名，作為獲得性心律失常人群樣本

10、，均為漢族，收集地區(qū)范圍同正常人群。對(duì)所有患者進(jìn)行詳細(xì)的病史詢問(wèn)和臨床檢查：包括暈厥史、暈厥首發(fā)年齡、發(fā)作頻率及次數(shù)、誘發(fā)因素等，排除家族史，記錄12導(dǎo)聯(lián)心電圖包括QTc測(cè)量。納入標(biāo)準(zhǔn)包括暈厥史，有記錄的室性心動(dòng)過(guò)速(尤其尖端扭轉(zhuǎn)型室速)或室顫，及獲得性LQT(藥物或心動(dòng)過(guò)緩相關(guān)的QTc延長(zhǎng))。同樣用直接DNA測(cè)序法，在76份獲得性心律失常血樣中對(duì)SCN5A基因進(jìn)行篩查，沒(méi)有找到突變位點(diǎn)及特異的SNPs。A1673G的等位基因頻率和基因

11、型頻率在兩組之間的分布存在顯著差異，等位基因G1673在心律失常人群中的分布遠(yuǎn)高于正常人群(p＜0.001)。G1673攜帶者發(fā)生心律失常的危險(xiǎn)性增加(OR為3.0；95％CI：1.6-15.7)，這個(gè)OR值不受年齡或性別的影響。但其余4個(gè)SNPs在正常對(duì)照組和心律失常人群之間的分布無(wú)顯著差異。進(jìn)一步研究SNPs與臨床指標(biāo)之間的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)多態(tài)位點(diǎn)G6174A在QTc正常患者與QTc延長(zhǎng)患者之間的分布存在顯著差異，A6174攜帶者更容易

12、出現(xiàn)QT間期的延長(zhǎng)(OR為5.3；95％CI：1.4-20.1)。 對(duì)以上結(jié)果進(jìn)行總結(jié)和分析，我們得出如下結(jié)論：1、SCN5A基因SNPs分布具有較大的民族差異。4245+82A＞G和G6174A呈中國(guó)漢族人群特異性。2、SCN5A基因4087insC突變是國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)的Brugada綜合征相關(guān)的基因變異。3、多態(tài)位點(diǎn)A1673G(H558R)與中國(guó)南方漢族人群的心律失常易感性相關(guān)，提示G1673(R558)攜帶者患心律失常的危