1、根據(jù)國際衛(wèi)生組織預測，到2020年，冠心病將成為人類的主要殺手。如何干預心肌缺血引發(fā)的心肌梗死及保護心臟愈來愈受到全球重視。而最有效挽救心肌梗塞的方法是盡快恢復缺血心肌的血流，即再灌注。目前，常采用溶栓療法、經(jīng)皮腔內(nèi)冠脈血管成型術等干預手段。然而，再灌注是一把雙刃劍，他本身可造成致命的損傷，即再灌注損傷。探索防治心肌缺血/再灌注損傷的藥物已成為當前研究的熱點。 目前已知的保護心臟，減少心肌缺血/再灌注損傷最有力的方法是缺血預適應

2、。但因倫理道德及使用不便等原因限制其臨床運用。隨著對缺血預適應本質(zhì)、特點和作用機理的不斷深入認識和研究，人們期望用藥物代替缺血刺激，促使機體釋放生物活性物質(zhì)或直接激活機體保護機制而產(chǎn)生心臟對缺血、缺氧的耐受。我國中藥資源極為豐富，從中尋找防治缺血/再灌注損傷安全有效的藥物，特別是對其有效成分進行藥效學及作用機制的研究，對于開發(fā)我國的植物資源和促進我國中藥現(xiàn)代化具有重要意義。 人參應用于中醫(yī)臨床已有兩千多年的歷史，具有廣泛的藥理作

3、用和醫(yī)療用途，用于增強精力，對抗各種生理應激。人參皂甙是人參的主要活性成分。最近，40多種人參皂甙被分離和鑒定。其中人參皂苷Rb1在人參含量最高，并具有多種藥理活性。例如，人參皂苷Rb1可清除氧自由基，抑制鈣過度內(nèi)流，改善能量代謝等。研究證明人參皂苷Rb1對神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)均有保護作用，但具體機制仍未清楚，值得我們進一步的深入探討。 本文采用結(jié)扎大鼠冠狀動脈前降支的心肌缺血/再灌注損傷模型，通過研究心肌梗死面積，血清酶學變化

4、和心肌細胞凋亡，觀察人參皂苷Rb1對心肌缺血/再灌注損傷的保護作用。并從氧化應激，信號通路等變化，分析其可能的作用機制，進一步為人參皂苷Rb1的開發(fā)利用提供科學依據(jù)。 本研究分三部分。 一、人參皂苷Rb1對大鼠心肌缺血/再灌注損傷的保護作用 目的:本實驗將通過經(jīng)典的心肌缺血/再灌注損傷模型，觀察人參皂苷Rb1對心肌缺血/再灌注損傷的保護作用，并從心肌梗死面積、氧化應激和心肌細胞凋亡三個層面初步探討人參皂苷Rb1抗

5、心肌缺血/再灌注損傷的作用機制。 方法: 1、心肌缺血/再灌注動物模型的建立結(jié)扎大鼠冠狀動脈前降支產(chǎn)生心肌缺血/再灌注損傷模型。 2、動物分組及實驗設計SD大鼠隨機分成3組：Sham組(n=9，假手術，只穿線，不結(jié)扎)，I/R組(n=9，單純?nèi)毖俟嘧?，Rb1組(n=9，人參皂苷Rb1預處理+缺血再灌注，左冠狀動脈前降支結(jié)扎前10min靜脈注入人參皂苷Rb140mg/kg)，除S組外，所有大鼠心臟都經(jīng)歷45mi

6、n缺血和120min再灌注。觀察心肌梗死面積。另外3組(n=9)，其余同上，觀察心肌細胞凋亡和病理學變化。另外3組(n=9)，其余同上，檢測氧化應激和部分凋亡指標。 3.觀察血流動力學指標，心肌梗死面積，血清酶學變化，心肌細胞凋亡，心肌SOD活力、MDA含量。 4.統(tǒng)計學分析用SPSS11.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析和t檢驗，結(jié)果以均數(shù)±標準誤(x±sE)表示，p<0.05為有統(tǒng)計學意義的差異。 小結(jié):

7、 本部分以SD大鼠為實驗動物，運用冠狀動脈前降支結(jié)扎心肌缺血/再灌注損傷模型。通過檢測血流動力學、心肌梗死面積、心肌酶、組織病理學、氧化應激及心肌細胞凋亡相關指標的變化證實了人參皂苷Rb1預處理具有抗心肌缺血/再灌注損傷的保護作用。這種作用可能與人參皂苷Rb1的抗氧化應激及抗心肌細胞凋亡的機制密切相關。 二、P13K/Akt通路在人參皂苷Rb1對大鼠心肌缺血/再灌注損傷保護中的作用 目的:在第一部分實驗的基礎上，

8、實驗擬利用冠狀動脈前降支結(jié)扎心肌缺血/再灌注損傷的大鼠模型及P13K抑制劑，通過檢測心肌梗死面積和Akt的蛋白表達來探討P13K/AKT信號通路是否參與人參皂苷Rb1預處理的心肌保護作用。 三、一氧化氮在人參皂苷Rb1對大鼠心肌缺血/再灌注損傷保護中的作用 目的:在第一部分和第二部分的實驗基礎上，本實驗擬利用冠狀動脈前降支結(jié)扎心肌缺血/再灌注損傷的大鼠模型及NOS抑制劑，通過檢測心肌梗死面積，P-eNOS的蛋白表達和心肌

9、組織NO含量來探討NO是否參與人參皂苷Rb1預處理的心肌保護作用。 結(jié)論 1.在本實驗的冠狀動脈前降支結(jié)扎心肌缺血/再灌注損傷模型中，心肌細胞存在明顯的氧化應激，壞死和凋亡的發(fā)生。 2.人參皂苷Rb1預處理可明顯抑制心肌缺血/再灌注損傷誘導的氧化應激，降低心肌梗死面積和心肌酶的釋放。 3.人參皂苷Rb1預處理抗心肌缺血/再灌注損傷的可能機制是通過增強細胞內(nèi)源性抗氧自由基系統(tǒng)的功能，減少氧自由基的產(chǎn)生，抑制

10、心肌細胞凋亡來實現(xiàn)的。 4.人參皂苷Rb1預處理具有抑制細胞凋亡作用。easpase-3參與了本實驗模型中的細胞凋亡，人參皂苷Rb1預處理可通過抑制細胞凋亡的關鍵酶Caspase-3的活性發(fā)揮抗凋亡作用。 5.特異性的PI3K阻斷劑，wortmannin明顯抑制了人參皂苷Rb1預處理誘導磷酸化AKT表達的增加和對心肌的保護。提示人參皂苷Rb1預處理可能通過激活PI3K/Akt信號通路發(fā)揮抗心肌缺血/再灌注損傷的作用。