IQGAP1在甲狀腺乳頭狀癌增殖侵襲轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf_第1頁(yè)
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1、研究背景:
  甲狀腺乳頭狀癌為甲狀腺惡性腫瘤最常見(jiàn)的一種類型,約占全部甲狀腺癌的80%。分化型甲狀腺癌,包括甲狀腺乳頭狀癌惡性程度低,治愈率高,預(yù)后較好。與腫瘤預(yù)后相關(guān)的臨床病理特征包括:老齡,男性,腫瘤直徑較大,腫瘤腺外侵潤(rùn),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,腫瘤分級(jí)高。盡管甲狀腺乳頭狀癌患者接受手術(shù)治療及放射性碘131治療后可獲得較好的效果,但仍面臨一定的復(fù)發(fā)率。同時(shí)對(duì)不適合手術(shù)治療及對(duì)碘131耐藥的患者,目前尚無(wú)理想治療方案。對(duì)甲狀腺

2、乳頭狀癌患者進(jìn)行預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是術(shù)后管理的重要手段,這將有利于降低復(fù)發(fā)率,提高總生存率。
  細(xì)胞骨架IQGAP1分子量為189-kDa,包含多個(gè)重要的蛋白結(jié)構(gòu)域,參與多個(gè)細(xì)胞過(guò)程中相關(guān)的分子相互作用參與調(diào)整這些細(xì)胞過(guò)程,從而影響細(xì)胞功能。越來(lái)越多的證據(jù)表明IQGAP1為原癌基因。如肝癌,乳腺癌,結(jié)腸癌,肺癌,胃癌,黑色素瘤中均檢測(cè)到IQGAP1高表達(dá)。目前已有研究證實(shí)IQGAP1在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá),但其在甲狀腺乳頭狀癌轉(zhuǎn)移灶

3、中的表達(dá)情況及其對(duì)甲狀腺乳頭狀癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用尚不清楚。利用IQGAP1可能早期診斷PTC惡性程度,用于預(yù)后判斷,同時(shí)也可能為PTC設(shè)計(jì)靶向藥物治療位點(diǎn)提供依據(jù)。
  研究IQGAP1在PTC及轉(zhuǎn)移灶,正常甲狀腺組織中的表達(dá)情況。判斷IQGAP1與PTC進(jìn)展的關(guān)系。通過(guò)RNA interference(RNAi)技術(shù)沉默PTC細(xì)胞株IQGAP1表達(dá)后,研究其對(duì)PTC細(xì)胞生長(zhǎng)增殖,侵襲轉(zhuǎn)移的影響。
  方法:
  (1)

4、收集湘雅醫(yī)院2013年3月至7月行甲狀腺手術(shù)患者的新鮮組織標(biāo)本。這些組織標(biāo)本分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,正常甲狀腺組織。新鮮組織標(biāo)本使用PCR、Western blotting免疫組化檢測(cè)IQGAP1 mRNA及蛋白表達(dá)情況。
  (2)培養(yǎng)PTC細(xì)胞株K1,TPC-1,BCPAP及正常甲狀腺細(xì)胞株Nthy-ori3-1。PCR、Western blotting篩選IQGAP1高表達(dá)細(xì)胞株用于基因沉默實(shí)驗(yàn)。
  (3

5、)構(gòu)建IQGAP1-siRNA沉默IQGAP1,免疫熒光技術(shù)判斷轉(zhuǎn)染效率。Western blotting檢測(cè)沉默效果。
  (4)沉默IQGAP1表達(dá)后,MTT法用于繪制生長(zhǎng)曲線,流式細(xì)胞儀分析腫瘤細(xì)胞增殖,凋亡情況,平板克隆形成實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞增殖。Transwell實(shí)驗(yàn),劃痕實(shí)驗(yàn)用于判斷腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。
  結(jié)果:
  (1) IQGAP1在腫瘤中表達(dá)明顯增高,癌組織IQGAP1明顯高于癌旁組織及正常甲狀腺組織

6、,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。一二組甲狀腺癌組織間比較,IQGAP1表達(dá)無(wú)明顯差異。轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)具有最高IQGAP1表達(dá)量,均高于一二組中癌組織(P<0.05),癌旁組織及正常甲狀腺組織中表達(dá)差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IQGAP1陽(yáng)性顆粒主要在細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)。
  (2) siIQ2在濃度為2μ mol/1時(shí)沉默K1和TPC-1細(xì)胞IQGAP1效率最高。IQGAP1蛋白表達(dá)量均減少超過(guò)70%,沉默效果佳。
  (3)沉默IQGAP

7、1抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。沉默K1和TPC-1細(xì)胞IQGAP1蛋白表達(dá)后,連96 h發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖能力明顯受到抑制,處于靜置期細(xì)胞增多,分裂期細(xì)胞減少,細(xì)胞增殖指數(shù)降低,細(xì)胞凋亡增多。
  (4) IQGAP1有促進(jìn)乳頭狀癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力。IQGAP1沉默后腫瘤細(xì)胞遷移過(guò)matrigel的能力減弱,在劃痕內(nèi)遷移的能力減弱。
  結(jié)論:
  (1)甲狀腺乳頭狀癌中IQGAP1在mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高,尤其在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

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