1、目的:
　　肺癌是目前世界上最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率高居惡性腫瘤之首,是病死率增長最快的惡性腫瘤。肺癌分為非小細胞肺癌(NSCLC)和小細胞肺癌(SCLC)兩大類,其中,NSCLC約占肺癌總發(fā)病率的85％,多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已達晚期,常合并惡性胸腔積液。傳統(tǒng)的治療手段如手術(shù)、放療、化療雖在不斷的發(fā)展,但仍具有一定局限性,肺癌總體生存率仍無明顯提高。隨著對腫瘤發(fā)病機制的進一步研究及生物免疫技術(shù)的不斷發(fā)展,生物治療成為治療惡性腫瘤的

2、重要方法之一,其中作為機體最強大抗原遞呈細胞和抗腫瘤免疫反應(yīng)的啟動者---樹突狀細胞（Dendritic cell,DC)備受關(guān)注。DC與細胞因子誘導的殺傷細胞(Cytokine-induced killer,CIK)共培養(yǎng)后獲得的DC-CIK具有增值快、殺傷力強的特點,是腫瘤生物治療研究的熱點之一。
　　本研究旨從非小細胞肺癌患者的惡性胸腔積液中獲取成熟樹突狀細胞,探討惡性胸腔積液來源的樹突狀細胞與細胞因子誘導的殺傷細胞共培養(yǎng)后

3、對細胞因子誘導的殺傷細胞的作用及樹突狀細胞、細胞因子誘導的殺傷細胞兩者共培養(yǎng)后聯(lián)合奧沙利鉑對 GLC-82肺腺癌細胞的體外殺傷作用,為晚期肺癌患者提供治療的新途徑。
　　方法:
　?、偈占?012年9月至2013年10月我院20例經(jīng)手術(shù)、纖維支氣管鏡、淋巴結(jié)活檢、經(jīng)皮肺穿刺活檢、痰檢等方法確診為非小細胞肺癌且合并胸腔積液患者的胸腔積液,每例收集800-1000ml。雙層密度梯度離心法及細胞貼壁法獲取惡性胸腔積液中DC前體細胞

4、,加入粒-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)培養(yǎng)9天收獲成熟DC;②分離健康人外周血單個核細胞(PBMC),加入干擾素-γ(IFN-γ)、CD3單克隆抗體(CD3Ab)、白介素-2(IL-2)體外誘導培養(yǎng)獲取CIK細胞,將培養(yǎng)9天的部分CIK細胞與惡性胸腔積液來源的成熟DC以5:1比例混合繼續(xù)培養(yǎng)5天獲得樹突狀細胞調(diào)節(jié)的細胞因子誘導的殺傷細胞(DC-CIK細胞);③流式細胞儀分別

5、鑒定DC、CIK細胞及DC-CIK細胞的細胞表型;④MTT法檢測奧沙利鉑、DC-CIK細胞、CIK細胞單組或聯(lián)合作用與GLC-82肺腺癌細胞后對GLC-82肺腺癌細胞的殺傷作用。
　　結(jié)果:
　　1.肺癌患者的惡性胸腔積液中可獲取 DC前體細胞,體外經(jīng)GM-CSF、IL-4等細胞因子誘導培養(yǎng)9天后可獲得成熟DC,經(jīng)流式細胞儀檢測培養(yǎng)9天的DC表面標志物與培養(yǎng)0天的DC表面標志物相比明顯升高,分別為 HLA-DR(70.97±

6、8.96)%vs(41.36±8.57)%、CD80(56.61±7.01)%vs(14.38±5.16)%、CD83(58.85±7.05)%vs(18.49±9.43)%、CD86(60.27±13.94)%vs(20.39±6.67)%(P<0.05)。
　　2.人外周血來源的CIK細胞與惡性胸腔積液來源的DC聯(lián)合培養(yǎng)獲得 DC-CIK細胞,流式細胞儀檢測 DC-CIK細胞的主要效應(yīng)細胞CD3+/CD56+細胞(22.71±

7、3.00)%與同期單獨培養(yǎng)的CIK細胞的主要效應(yīng)細胞CD3+/CD56+細胞(6.90±1.33)%相比明顯增加(P<0.05),MTT法檢測DC-CIK細胞對GLC-82肺腺癌體外殺傷作用與CIK細胞亦明顯增強(P<0.05)。
　　3.DC-CIK細胞聯(lián)合奧沙利鉑對GLC-82肺腺癌細胞的殺傷作用明顯高于單獨DC-CIK細胞治療組及單獨奧沙利鉑治療組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　肺癌患者惡性