1、最近有關(guān)西方國(guó)家前列腺癌的研究證實(shí)，SPINK1過(guò)表達(dá)為ETS基因融合陰性的前列腺癌病例中侵襲性較強(qiáng)的一種分子亞型，然而SPINK1對(duì)前列腺癌腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移發(fā)揮作用的具體機(jī)制尚未明確。我們收集了224例前列腺癌病例，證實(shí)在中國(guó)前列腺癌患者中SPINK1過(guò)表達(dá)與不良預(yù)后具有顯著的相關(guān)性(P=0.025)，且與EGFR具有共同過(guò)表達(dá)的特征(P=0.003)。本研究中的體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)SPINK1可促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithe

2、lial-mesenchymaltransition，EMT)，從而增強(qiáng)前列腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。進(jìn)一步的研究證實(shí)SPINK1主要通過(guò)EGFR/MEK/ERK通路發(fā)揮促進(jìn)EMT的作用，CTGF可能為該通路下游的關(guān)鍵作用分子。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為SPINK1在中國(guó)前列腺癌中作為診斷指標(biāo)及治療靶點(diǎn)提供了更深入的實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。
　　第一部分SPINK1在前列腺癌組織中的表達(dá)、臨床病理學(xué)特征及與預(yù)后的關(guān)系
　　目的:
　　1.研究中

3、國(guó)前列腺癌組織中SPINK1過(guò)表達(dá)的頻度及其與患者不良預(yù)后的相關(guān)性。
　　2.探究在中國(guó)前列腺癌組織中SPINK1過(guò)表達(dá)與其他分子指標(biāo)的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.中國(guó)前列腺癌中SPINK1過(guò)表達(dá)的發(fā)生頻率為7.6％，與患者不良預(yù)后相關(guān)。
　　2.SPINK1過(guò)表達(dá)與TMPRSS2-ERG基因融合存在排他性。
　　3.EGFR過(guò)表達(dá)的發(fā)生率在SPINK1陽(yáng)性的前列腺癌病例中比在SPINK1陰性的前列腺癌病

4、例中高。
　　4.SPINK1陽(yáng)性病例中E-Cadherin表達(dá)相對(duì)較低，vimentin表達(dá)相對(duì)較高。
　　結(jié)論:
　　在中國(guó)前列腺癌病例中SPINK1過(guò)表達(dá)的發(fā)生頻率為7.6％，與西方國(guó)家接近。與關(guān)于SPINK1在西方國(guó)家的相關(guān)報(bào)道一致，SPINK1過(guò)表達(dá)與TMPRSS2-ERG基因融合呈現(xiàn)排他性存在，SPINK過(guò)表達(dá)與不良預(yù)后具有顯著相關(guān)性。另外，我們首次證實(shí)在前列腺癌組織中SPINK1與EGFR存在共過(guò)表達(dá)的趨

5、勢(shì)。SPINK1陽(yáng)性病例中E-Cadherin表達(dá)相對(duì)較低，vimentin表達(dá)相對(duì)較高，暗示SPINK1可能與前列腺癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程有關(guān)。
　　第二部分SPINK1促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
　　目的:
　　1.明確SPINK1是否可誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞由上皮細(xì)胞表型向間質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變。
　　2.探究SPINK1是否可引起前列腺癌細(xì)胞上皮指標(biāo)及間質(zhì)指標(biāo)蛋白表達(dá)量的改變。
　　3.驗(yàn)證SPINK1對(duì)

6、前列腺癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響。
　　結(jié)果:
　　1.rSPINK1持續(xù)刺激6天后，RWPE、LnCap及VCap細(xì)胞中均含有一定比例的細(xì)胞變?yōu)殚L(zhǎng)梭形，細(xì)胞失去極性，細(xì)胞分布較松散。
　　2.westernblot及免疫熒光技術(shù)均證明rSPINK1可引起RWPE細(xì)胞中E-Cadherin表達(dá)量增多、vimentin表達(dá)量減少，而轉(zhuǎn)染SPINK1SiRNA則可引起22RV1細(xì)胞中E-Cadherin表達(dá)量上調(diào)、vimen

7、tin表達(dá)量下調(diào)。
　　3.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)證實(shí)rSPINK1可促進(jìn)RWPE細(xì)胞遷移侵襲能力增強(qiáng)，SPINK1SiRNA可抑制22RV1細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論:
　　我們首次證實(shí)SPINK1在體外可促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT。
　　第三部分SPINK1促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究
　　目的:
　　1.明確SPINK1是否通過(guò)EGFR通路促進(jìn)EMT及具體通過(guò)哪條下游通路促進(jìn)EMT。<

8、br>　　2.明確SPINK1通過(guò)EGFR通路調(diào)控的促進(jìn)EMT的下游關(guān)鍵作用分子。
　　結(jié)果:
　　1.rSPINK1作用于RWPE細(xì)胞，可使其p-EGFR、p-STAT3、p-Akt、p-ERK水平升高。轉(zhuǎn)染SPINK1SiRNA的22RV1細(xì)胞，相對(duì)于其對(duì)照組，EGFR、STAT3、Akt、ERK磷酸化水平均顯著降低。
　　2.AG1478和U0126可幾乎完全阻斷rSPINK1對(duì)EMT分子指標(biāo)的調(diào)節(jié)作用。而LY2

9、94002和AG490只可較低程度地抑制rSPINK1對(duì)EMT分子指標(biāo)的調(diào)節(jié)作用。
　　3.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果示AG1478、U0126、LY294002、AG490均可完全阻斷rSPINK對(duì)細(xì)胞遷移能力的提高作用。侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果示只有AG1478、U0126可阻斷rSPINK對(duì)細(xì)胞侵襲的促進(jìn)作用。
　　4.rSPINK1處理RWPE細(xì)胞，SPINK1SiRNA轉(zhuǎn)染22RV1細(xì)胞，snail、slug、twist、β-caten

10、in、zeb1的mRNA表達(dá)量及核內(nèi)蛋白表達(dá)量均無(wú)明顯變化。
　　5.rSPINK1處理RWPE細(xì)胞，CTGF表達(dá)量升高;SPINK1SiRNA轉(zhuǎn)染22RV1細(xì)胞，CTGF表達(dá)量下降。
　　6.CTGFSiRNA轉(zhuǎn)染RWPE細(xì)胞可部分逆轉(zhuǎn)rSPINK1促進(jìn)EMT的作用。
　　7.AG1478和U0126可阻斷rSPINK1對(duì)CTGF的上調(diào)作用，而LY294002和AG490無(wú)此作用。
　　結(jié)論:
　　1.S