1、研究背景：
　　前列腺癌(Prostate Cancer，PCa)是男性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在歐美國家僅次于肺癌，位居男性第二位。雄激素剝奪治療(Androgendeprivation therapy, ADT)是進展期前列腺癌最常用的一線治療方法。然而ADT對于進展期前列腺癌僅僅起到緩解的作用，而非治愈性的。大部分男性只有在治療早期出現(xiàn)短暫的癌瘤縮小。治療12～18個月后，幾乎所有患者最終轉(zhuǎn)為去勢抵抗性前列

2、腺癌(Castration resistant prostate cancer, CRPC)，預后極差。目前，關(guān)于CRPC的發(fā)生機制極為復雜，主要包括雄激素受體(Androgen receptor,AR)依賴性和AR非依賴性兩類機制。其中，AR依賴性的機制主要涉及AR基因擴增、AR基因突變，共調(diào)節(jié)因子異常及AR的非配體依賴性激活等。事實上，在去勢治療后，盡管體內(nèi)雄激素水平顯著下降，但AR及其介導的通路仍保持活躍狀態(tài)。
　　自從Hi

3、ggins和Hodges兩位科學家報道類固醇激素在前列腺癌進展和治療中的重要性以來，雌激素(17β-estradiol，E2)，作為一種典型的類固醇激素，在前列腺正常組織及前列腺癌中發(fā)揮的作用受到了越來越多的關(guān)注。眾所周知，E2在體內(nèi)主要是通過它的兩個經(jīng)典受體雌激素受體α(ERα)和雌激素受體β(ERβ)發(fā)揮各種各樣的生物學作用。在前列腺組織中，ERα主要表達于組織的間質(zhì)中，而ERβ主要表達于前列腺上皮的基底層和分泌層。傳統(tǒng)觀點認為:E

4、Rα介導E2對于生物體有害的效應，而ERβ介導著E2的抑癌效應。ERβ被認為在細胞增殖功能上可以拮抗ERα，并表現(xiàn)出一種抗侵襲和抗轉(zhuǎn)移的潛能。然而，越來越多的證據(jù)表明ERβ在前列腺癌中也發(fā)揮著類似癌基因的作用。因此，ERβ在前列腺癌中的具體作用仍需更加深入的研究。
　　SOX家族是一類SRY(Sex Determination Region ofY Chromosome)相關(guān)基因構(gòu)成的基因家族，編碼一系列SOX（SRY-relat

5、ed HMG-box）轉(zhuǎn)錄因子。迄今，已發(fā)現(xiàn)SOX家族包括20個成員，可分為A-H共8個亞族。SOX4基因是C亞族成員，參與胚胎發(fā)育、干細胞的維持和調(diào)控細胞分化。在許多癌癥中，SOX4這個關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子的異常表達可以通過誘導上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)和轉(zhuǎn)移的方式，與細胞加速增殖和凋亡抑制相關(guān)。SOX4在前列腺癌中可能扮演著一個轉(zhuǎn)化性癌基因的角色。雖然已在接近三分之一的前列腺

6、癌患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了SOX4的過表達，但SOX4基因過表達的分子機制仍不明確。
　　實驗方法：
　　免疫組織化學染色(Immuohistochemistry, IHC)用于檢測SOX4蛋白的表達、分布特點，及其與ERβ之間的相關(guān)性，實時定量PCR和Western blotting被用于研究轉(zhuǎn)錄和蛋白表達水平。細胞免疫熒光染色和免疫共沉淀(co-Immunoprecipitation，co-IP)評估ERβ和AR的亞細胞定位及相互

7、作用。通過染色質(zhì)免疫沉淀實驗(chromatin-Immunoprecipitation，ChIP)和熒光素酶報告基因?qū)嶒炋接慐Rβ和AR與SOX4啟動子區(qū)的結(jié)合以及對啟動子活性的影響。MTS，侵襲和劃痕實驗評估細胞功能。
　　實驗結(jié)果：
　　我們的研究發(fā)現(xiàn)，相比于激素依賴性前列腺癌(Hormone dependent prostate cancer,HDPC)病例，在CRPC中SOX4表達上調(diào)。前列腺癌的細胞LNCaP經(jīng)過

8、長期的雄激素剝奪后也觀察到SOX4蛋白表達上調(diào)，這證實了IHC結(jié)果，并進一步提示SOX4在去勢抵抗性前列腺癌中的潛在作用。體外數(shù)據(jù)表明， DHT以劑量依賴的方式顯著下調(diào)LNCaP和VCaP細胞系中SOX4的mRNA和蛋白表達。我們還發(fā)現(xiàn)，DHT抑制SOX4表達的過程呈現(xiàn)時間依賴性。ChIP實驗證實SOX4是AR的靶基因。在缺乏雄激素的情況下，E2通過ERβ和AR之間的蛋白復合物的形成上調(diào)SOX4表達。敲除AR或ERβ可以抵消E2誘導SO

9、X4表達，這表明，這兩種受體是E2誘導SOX4表達所必需的。ChIP實驗證實，在E2刺激后，ERβ和AR均結(jié)合到SOX4啟動子。因此，無論是由DHT或E2激活，AR起著SOX4表達的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的根本性作用。此外，AR可以在于不同的配體結(jié)合時可表現(xiàn)出不同的轉(zhuǎn)錄行為。在功能上，沉默SOX4顯著減弱的E2促進PCa細胞增殖、侵襲和遷移的作用。在HDPC和CRPC的臨床樣本中，SOX4的過表達與ERβ陽性有顯著相關(guān)性。
　　結(jié)論：