1、目的REV3L是DNA聚合酶ζ(PoIζ)的催化亞基，在跨損傷DNA合成通路(TLS)中起關(guān)鍵作用。本課題旨在研究REV3L基因?qū)m頸癌細(xì)胞化療敏感性的影響，探討REV3L基因在宮頸癌中作為分子靶點(diǎn)的價(jià)值。
　　方法采用免疫組化法檢測(cè)123例宮頸癌組織及17例正常宮頸組織中PoIζ蛋白的表達(dá)水平。構(gòu)建REV3L基因過(guò)表達(dá)載體pcDNA-REV3L后導(dǎo)入REV3L低表達(dá)的宮頸癌細(xì)胞系，構(gòu)建REV3L基因干擾載體shRNA-REV3L

2、并轉(zhuǎn)染REV3L高表達(dá)宮頸癌細(xì)胞系后，通過(guò)CCK-8法檢測(cè)對(duì)細(xì)胞增殖、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期變化、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)克隆形成率的變化，進(jìn)一步通過(guò)CCK-8法檢測(cè)REV3L基因?qū)︺K類藥物耐受性的影響，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)藥物作用后細(xì)胞凋亡情況，并通過(guò)蛋白免疫印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bcl-xl及Bax等的變化情況。通過(guò)免疫熒光法檢測(cè)順鉑處理后REV3L基因?qū)Ζ?H2AX焦點(diǎn)形成情況的影響，蛋白免疫印跡法檢測(cè)γ-H2AX等蛋白的變

3、化。
　　結(jié)果宮頸癌組織中PoIζ蛋白表達(dá)水平較正常宮頸組織高(P＜0.05)。REV3L基因沉默后宮頸癌細(xì)胞株增殖減慢，REV3L基因過(guò)表達(dá)后宮頸癌細(xì)胞株增殖加快;沉默REV3L基因通過(guò)G1/S期阻滯抑制細(xì)胞周期進(jìn)展，而REV3L基因過(guò)表達(dá)后可以越過(guò)G1/S期細(xì)胞周期檢查點(diǎn)促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)展;REV3L基因沉默后細(xì)胞平板克隆形成率減少，而過(guò)表達(dá)后細(xì)胞克隆形成率增加。下調(diào)宮頸癌細(xì)胞系REV3L基因表達(dá)后CCK-8檢測(cè)示宮頸癌細(xì)胞對(duì)順

4、鉑的敏感性增加;流式細(xì)胞儀檢測(cè)順鉑作用后早期凋亡率增加;Western blot檢測(cè)促凋亡蛋白升高，而抗凋亡蛋白降低;免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)γ-H2AX焦點(diǎn)形成增多，Western blot檢測(cè)γ-H2AX蛋白表達(dá)升高。REV3L基因過(guò)表達(dá)后CCK-8示細(xì)胞對(duì)順鉑的抵抗性增加;流式細(xì)胞儀檢測(cè)順鉑作用后早期凋亡率降低;Western blot檢測(cè)促凋亡蛋白降低，而抗凋亡蛋白升高;免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)γ-H2AX焦點(diǎn)形成減少，Westernblo