1、宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，盡管已有人乳頭瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)疫苗等預防措施，但仍然嚴重威脅著女性健康，且發(fā)病年齡呈年輕化趨勢，在14～44歲女性中的致死率僅次于乳腺癌。宮頸癌的致病因素有多種，其中高危型的HPV病毒感染是導致宮頸癌形成的主要因素。HPV的病毒癌基因E6及E7影響到細胞內周期蛋白的表達及功能，比如:E6基因的表達產物能夠降解抑癌蛋白p53從而抑制其作用的發(fā)揮;E7基因能夠降解抑癌

2、蛋白pRb，導致宮頸癌的發(fā)生。雖然近年已有針對HPV病毒疫苗，但疫苗具有一定的局限性，僅針對于少數(shù)特定的HPV病毒型，并且對于宮頸癌患者及HPV攜帶者沒有有效的作用。臨床治療宮頸癌的主要手段仍然依賴于傳統(tǒng)的手術、放射治療與藥物化療。其中化療通常作為宮頸癌治療的常用輔助手段，配合手術治療、放療。
　　鉑類藥物是常用的化療藥物，如順鉑，卡鉑，奧沙利鉑等。順鉑是典型的鉑類藥物之一，在結構上，它由一個二價鉑與兩個氯原子及兩個氨分子構成，分

3、子質量為301.1。順鉑進入細胞后經歷一系列水合作用，一個或兩個氯原子被水分子取代，成為有活性的形式?；罨捻樸K是一類具有高度活性的分子，可以結合DNA、RNA、蛋白質和膜磷脂等，其中順鉑與DNA形成鏈內及鏈間的加合物，從而阻斷DNA的復制與轉錄過程，使細胞周期阻斷從而導致細胞死亡，是順鉑介導細胞毒性的主要機制。
　　盡管化療是癌癥患者主要的治療手段，然而在化療過程中，癌細胞可通過獲得性或固有性方式產生針對各種抗腫瘤藥物的耐藥性，

4、即多藥耐藥。多藥耐藥往往導致化療失敗，是導致腫瘤患者復發(fā)和死亡的突出臨床問題。多藥耐藥的具體機制十分復雜，其中最重要的機制是可利用三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)為能量驅動多種抗癌藥物外排的ATP結合盒轉運蛋白(ATP-binding cassette(ABC) transporters)高表達。多藥耐藥蛋白(MRP)亞家族是ABC轉運體超家族的C組，又稱ABCC，其中MRP2、MRP5及MRP6與細胞

5、的鉑類藥物耐藥有關。
　　PGRN（progranulin，前體顆粒蛋白），是由7.5個串聯(lián)重復的富含半胱氨酸的GRN基序組成，參與多種生物學功能?，F(xiàn)已證實PGRN與炎癥反應、損傷修復、軟骨發(fā)育、早期胚胎發(fā)育、神經退行性疾病及腫瘤形成有關。有研究報道PGRN能夠保護細胞抵抗順鉑導致的細胞死亡，但未對具體的機制做深入的研究，且僅在肝癌細胞系誘導的順鉑耐受細胞株中進行了實驗。
　　前期研究發(fā)現(xiàn)PGRN在宮頸癌組織中高表達，PGR

6、N能夠促進宮頸癌細胞惡性轉化與增殖。然而，PGRN在宮頸癌化療藥物應答中的作用及PGRN促進順鉑化療耐受的分子機制還有待深入研究。
　　目的:本論文旨在表征PGRN在順鉑處理的宮頸癌細胞中的表達變化;明確PGRN在順鉑化療耐受中的功能，探索PGRN促進化療耐受的機制及關鍵的調控通路。
　　方祛:利用順鉑處理宮頸癌細胞系（HeLa、SiHa及CaSki）檢測PGRN的mRNA和蛋白質水平表達變化;通過加入重組PGRN或抑制細胞

7、內PGRN表達，使用CCK8、流式細胞術等方法檢測順鉑處理的宮頸癌細胞細胞活力、細胞死亡與凋亡、DNA損傷等的影響;利用ICP-MS技術檢測宮頸癌細胞內外鉑元素的含量;使用實時熒光定量PCR、免疫印跡法分析PGRN處理的宮頸癌細胞中多藥耐藥相關蛋白MRP2和轉錄因子NRF2的表達變化。
　　結果:順鉑能夠劑量和時間依賴性地促進宮頸癌細胞系中PGRN的表達，PGRN能夠緩解順鉑對細胞造成的細胞活力阻滯，抵抗順鉑造成的細胞死亡及DNA

8、損傷，PGRN能夠增強細胞對順鉑的外排作用，減少細胞內的藥物積累;PGRN能夠通過NRF2提高細胞內多藥耐藥蛋白MRP2的表達水平，參與PGRN介導的順鉑外排及順鉑耐受。
　　結論:本論文首次發(fā)現(xiàn)PGRN能夠抵抗順鉑誘導的宮頸癌細胞死亡，促進癌細胞的生存發(fā)展;首次證實了PGRN能夠通過轉錄因子NRF2促進MRP2轉錄表達，降低宮頸癌細胞內順鉑藥物的積累增加藥物的外排，介導順鉑耐受。這些研究進一步完善了PGRN對宮頸癌細胞發(fā)生發(fā)展的