hBD-2體外抗菌免疫防御功能的研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
　　構(gòu)建人鼻黏膜上皮細(xì)胞原代體外培養(yǎng)模型，評(píng)估hBD-2基因轉(zhuǎn)染人鼻黏膜原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物蛋白質(zhì)的體外抗菌活性，為進(jìn)一步hBD-2在體內(nèi)的免疫防御功能研究提供依據(jù)。
　　方法:
　　1.收集人下鼻甲黏膜，酶消化結(jié)合組織塊法體外培養(yǎng)人鼻黏膜上皮細(xì)胞，免疫組化鑒定結(jié)果;
　　2.脂質(zhì)體Lipofectamine2000介導(dǎo)重組pIRE S2-Zsgreen1-hBD2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人鼻黏膜上皮細(xì)胞，熒光顯微鏡、熒

2、光定量RT-PCR法檢測(cè)人鼻黏膜上皮細(xì)胞hBD-2表達(dá);
　　3.收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，用打孔法評(píng)價(jià)對(duì)鼻-鼻竇炎常見(jiàn)菌群的抗菌活性。
　　結(jié)果:
　　1.經(jīng)細(xì)胞角蛋白AE1/AE2免疫組化鑒定體外培養(yǎng)的人鼻黏膜原代細(xì)胞為上皮細(xì)胞，細(xì)胞陽(yáng)性率達(dá)93.1％;
　　2.熒光顯微鏡檢測(cè)hBD-2轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞表現(xiàn)出綠色熒光，轉(zhuǎn)染率約35％。熒光定量RT-PCR法檢測(cè)人鼻黏膜上皮細(xì)胞hBD-2mRNA表達(dá)升高;
　　3.轉(zhuǎn)

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