1、目的:結(jié)直腸癌是一種嚴(yán)重威脅人類生命健康的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，統(tǒng)計分析報告顯示其在常見癌癥中位居第三位，發(fā)病率及病死率呈現(xiàn)出日益增高的趨勢。結(jié)直腸癌是多種因素、多個基因相互作用逐步發(fā)展的結(jié)果，但其具體的發(fā)生發(fā)展機制尚不完全明確。Notch-1包含多種表皮生長因子樣重復(fù)序列組成的細胞外區(qū)和多種不同結(jié)構(gòu)域組成的細胞內(nèi)區(qū)，相對分子質(zhì)量約為30kD，羧基端位于細胞質(zhì)內(nèi)，氨基端位于細胞外。它是一個廣泛存在于生物進化過程中的高度保守分子，參與細胞

2、信號的傳導(dǎo)，調(diào)控細胞的增殖、分化、凋亡，并且與腫瘤發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)Notch-1在結(jié)直腸癌組織過表達，與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展有著一定的關(guān)聯(lián)。通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測結(jié)直腸癌患者組織中Notch-1的表達，同時用CCK-8法研究不同濃度DAPT對結(jié)直腸癌細胞增殖活性凋亡的影響，為深入了解Notch-1在結(jié)直腸癌發(fā)病機制中發(fā)揮的作用提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、收集2002

3、年9月～2012年9月40例來自河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院、河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院結(jié)直腸癌手術(shù)標(biāo)本。每例標(biāo)本分別取自結(jié)直腸原發(fā)腫瘤組織及上（下）切緣正常黏膜且術(shù)后病理證實無癌組織侵犯的癌旁組織。新鮮標(biāo)本離體后迅速置于液氮中，于-80℃保存。40名患者術(shù)前未接受任何化療和放療。
　　2、選取結(jié)直腸癌細胞株HCT116進行細胞培養(yǎng)。
　　3、應(yīng)用qRT-PCR方法檢測40例結(jié)直腸癌組織及對應(yīng)結(jié)直腸正常黏膜組織中Notch-1的表達水平，

4、比較兩組間表達差異，并分析Notch-1的表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。
　　4、對HCT116細胞進行不同濃度DAPT處理，將不同濃度DAPT處理后細胞組作為實驗組，將未處理細胞組作為對照組。
　　5、HCT116細胞進行不同濃度的DAPT處理后1、2、3、4d，分別應(yīng)用CCK-8法檢測4個時點的OD值，并繪制出細胞生長曲線，觀察對照組和實驗組間細胞增殖變化情況。
　　6、應(yīng)用流式細胞技術(shù)檢測不同濃度DAPT

5、處理后HCT116細胞凋亡情況，比較對照組和實驗組之間的差異。
　　7、采用SPSS19.0及GraphPad Prism5.0統(tǒng)計軟件，對實驗結(jié)果進行分析，計量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)）表示，兩組間配對樣本采用非參數(shù)檢驗、多組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，重復(fù)測量數(shù)據(jù)采用雙因素方差分析。繪制各臨床病理資料的Kaplan-Meier生存曲線，采用時序檢驗比較兩條曲線的差異。生存時間為自手術(shù)之日起至其死亡或末次隨訪日所經(jīng)歷的時間，以月

6、為單位計算。采用Cox回歸分析對基因表達和臨床參數(shù)進行多因素生存分析，分析影響生存的危險因素，以P＜0.05表示差異存在有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、Notch-1在40例結(jié)直腸癌組織中表達量0.0568(0.0302，0.0757)，正常黏膜組織中表達量0.0107(0.0068，0.0231)，可見Notch-1在癌組織中的表達明顯高于正常黏膜組織中的表達(P＜0.0001)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、No

7、tch-1在腫瘤大于等于5cm表達水平為0.0686(0.0508，0.1321)明顯高于腫瘤小于5cm表達水平0.0500(0.0286，0.0660)(ss=0.0236);Notch-1表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡、性別、浸潤深度無明顯關(guān)系，各指標(biāo)組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　3、HCT116細胞不同濃度DAPT處理后Notch-1表達量出現(xiàn)下降。
　　4、HCT116細胞不同濃度DAPT處理后1、2、3、4d，通

8、過CCK-8法檢測各組細胞增殖情況，結(jié)果顯示:10μM DAPT可以明顯抑制結(jié)直腸癌細胞的增殖，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.0001)。
　　5、HCT116細胞中，實驗組10μM早期凋亡率（2.785±0.4070）％明顯高于對照組（0.2950±0.1530）％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0046);實驗組5μM早期凋亡率(0.8250±0.1934)％高于對照組（0.2950±0.1530）％，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0

9、981);實驗組1μM早期凋亡率（0.6150±0.1472）％高于對照組（0.2950±0.1530）％，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.2063)。
　　6、隨訪生存率，并行單因素發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌患者生存率與淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移(P=0.0002)及腫瘤侵潤深度(P=0.0137)有關(guān)，與性別、年齡、腫瘤大小、Notch-1表達水平無關(guān)(P＞0.05)。
　　7、多因素Cox生存分析:Cox多因素生存分析結(jié)果顯示影響結(jié)直腸癌患者生存率

10、獨立危險因素是淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移(P=0.003)，未發(fā)現(xiàn)性別、年齡、腫瘤大小、Notch-1表達水平、浸潤深度與結(jié)直腸癌患者生存率有明顯相關(guān)性(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、Notch-1在結(jié)直腸癌中高表達，提示其可能對結(jié)直腸癌具有癌基因作用。
　　2、Notch-1在大于等于5cm的腫瘤表達水平上調(diào)更明顯，提示其可能對判定結(jié)直腸癌惡性程度和預(yù)后有一定的意義。
　　3、Notch-1可能通過促進結(jié)直腸癌細胞