1、新型免疫抑制藥物的研制及發(fā)展，為整形外科在異體復合組織移植領域的穩(wěn)步發(fā)展帶來了新的機遇。然而，異體復合組織移植（CTA）的發(fā)展遠遠不似內臟器官移植一樣迅速，究其根本，是因為異體復合組織移植物組分復雜，并且抗原性不均一。自1998年首次手移植被Dubernard成功實施以來，到目前為止,在臨床上已完成超過60例手移植和23例異體顏面移植。第一例異體顏面移植在法國成功施行手術后，曾經發(fā)生2次急性排斥反應，第二例患者是在本科室成功實施后，術后

2、也發(fā)生了3次急性排斥反應。加大免疫抑制劑用量是使排斥反應得到控制的有效方法，但是往往會出現各種棘手的并發(fā)癥如急性腎衰、高血壓癥等。鑒于上述原因，尋找可以使免疫抑制劑用量最小化的方法，已成為CTA移植領域重點研究的項目。
　　免疫應答的一般規(guī)律同樣適用于異體復合組織移植排斥反應的發(fā)生，首先，外來的異體抗原被免疫識別之后激活機體免疫系統(tǒng)，繼而產生對移植物的免疫排斥反應，也就是說，阻斷免疫應答中的任何一個環(huán)節(jié)，都可以實現對移植免疫耐受的

3、誘導。
　　細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4抗體融合蛋白（CTLA4-Ig）可以阻斷CD28-B7途徑，能有效誘導免疫耐受的發(fā)生。樹突狀細胞毋庸置疑是最主要的抗原提呈細胞，在其表面可以高水平表達MHC-II類分子以及CD80、CD86等共刺激分子，通過B7分子與CD28的結合，開啟第二信號刺激途徑，從而激活初始T細胞。成熟的樹突狀細胞具有淋巴歸巢的特性，因此，CTLA4-Ig重組慢病毒轉染的成熟樹突狀細胞有可能成為細胞回輸治療方案的備

4、選細胞。
　　目的：
　　研究CTLA4-Ig直接淋巴結注射后其表達效率、CTLA4-Ig重組慢病毒轉染成熟樹突狀細胞后相關基因的表達，局部注射轉染后的成熟樹突狀細胞后觀察CTLA4-Ig在引流淋巴結內的表達，探索淋巴結直接基因治療方法的可行性；試圖通過局部細胞治療誘導免疫耐受，降低全身免疫抑制劑的用量，為同種異體復合組織移植探索新途徑。
　　方法：
　　1．大鼠淋巴結內注射CTLA4-Ig重組慢病毒，觀察CTL

5、A4-Ig在淋巴結內的表達。
　　2．貼壁培養(yǎng)法體外誘導成熟樹突狀細胞，進行形態(tài)學鑒定、活性及表型鑒定，體外鑒定其免疫學功能。
　　3．體外試驗研究CTLA4-Ig重組慢病毒轉染大鼠成熟樹突狀細胞，觀測CTLA4-Ig的表達時間及表達高峰。
　　4．體內試驗研究CTLA4-Ig重組慢病毒轉染的成熟樹突狀細胞于大鼠引流淋巴結的定向表達。
　　結果：
　　1．實時熒光定量PCR及冰凍切片示，空白對照及陰性對照組

6、淋巴結內均無CTLA4-Ig的表達。CTLA4-Ig重組慢病毒淋巴結內注射組有明顯的CTLA4-Ig表達。
　　2．光鏡見培養(yǎng)的成熟樹突狀細胞集落分散，懸浮，分布較均勻。掃描電鏡見細胞表面大量褶皺與粗細不等的突起。流式細胞術顯示成熟樹突狀細胞表面的DC功能相關抗原MHCII、CD80、CD86均高表達。功能試驗檢測其分泌IL-12能力較未成熟樹突狀細胞強，混合淋巴細胞反應顯示其有強的刺激T細胞增殖的能力?；罴毎蕿椋?0.34±1

7、.25）％。
　　3．慢病毒轉染成熟樹突狀細胞76h后，于倒置熒光顯微鏡下可觀察到熒光表達。隨時間延長，熒光表達增多，細胞形態(tài)亦出現老化。轉染后第7d細胞明顯老化。Q-PCR示CTLA4-Ig重組慢病毒轉染成熟樹突狀細胞第3天，于mRNA水平有CTLA4-Ig的表達，westernblotting檢測所示結果與Q-PCR一致。
　　4．距大鼠腋固有淋巴結處2公分皮下緩慢注射所收獲的CTLA4-Ig重組慢病毒轉染后第3天的DC