1、目的：在已有的研究基礎上，研究珠母貝糖胺聚糖(GAG)抗L<,1210>白血病作用，探討其在抑制腫瘤血管生成、增強機體免疫力方面的抗腫瘤作用機理。 方法：1．雙酶法提取珠母貝GAG粗品(CPG)，DEAE-52-纖維素柱分離純化珠母貝GAG，采用小鼠急性毒性實驗檢測CPG的毒性。 2．采用體內外實驗法探討珠母貝GAG的抗L<,1210>白血病作用。MTT法檢測珠母貝GAG粗品(CPG)、純化級分(GAG-1、GAG-2)

2、體外對L<,1210>細胞生長的抑制作用，并探討CPG與化療藥順鉑(DDP)合用時對L<,1210>細胞生長的抑制效果。建立移植性L<,1210>白血病荷瘤小鼠模型，檢測CPG對荷L<,1210>白血病小鼠的生命延長率及腹圍的影響，并初步探討CPG和環(huán)磷酰胺(CY)的協(xié)同抑瘤作用。 3．以雞胚絨毛尿囊膜(CAM)為模型，檢測CPG、GAG-1、GAG-2對CAM血管生成的影響，并探討CPG、GAG-1、GAG-2與5-氟尿嘧啶(

3、5-FU)合用時對CAM血管生成的抑制效果，以探討珠母貝GAG抗腫瘤血管生成方面的抗腫瘤作用機理。 4．檢測CPG對正常及免疫抑制小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)的影響，CPG、GAG-1、GAG-2體外對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅及產生一氧化氮(NO)能力的影響，CPG、GAG-l、GAG-2體外對小鼠脾淋巴細胞增殖能力的影響，探討珠母貝GAG增強機體免疫力方面的抗腫瘤作用機理。 結果：1．本實驗提取純化的珠母貝糖胺聚糖各級分(C

4、PG、GAG-1、GAG-2)主要技術指標與本實驗室前期研究結果基本一致，說明珠母貝GAG提取純化技術成熟，結果穩(wěn)定。急性毒性實驗結果顯示，CPG對小鼠經(jīng)口的半數(shù)致死量LD<，50>>21.50g/kg，為安全無毒。 2．CPG、GAG-1、GAG-2體外對L<,12l0>細胞生長均有一定的抑制作用，其中GAG-1效果最好，在250ug/ml劑量下作用24h，抑制率達51.7％(P<0.01)。CPG和GAG-2抑制效果相當，相

5、同條件下，CPG、GAG-2的抑制率分別為31.4％(P<0.01)、23.8％(P<0.05)。CPG與DDP合用能增強DDP對L<,1210>細胞生長的抑制效果，100ug/ml劑量的CPG與0.1ug/ml劑量的DDP共同作用24h能使DDP的抑制率從11.0％(P<0.05)升高到42.4％(P<0.01)。CPG具有一定的延長荷L<,1210>白血病小鼠生命的作用，其中100mg/kg劑量組小鼠的生命延長率為19.3％(P<0

6、.05)。腹圍測定結果顯示，CPG不同劑量組的小鼠腹圍均少于生理鹽水對照組，但無統(tǒng)計學意義，其結果與生命延長率有一定的相關性。另外實驗結果還顯示：30mg/kg劑量的CPG與環(huán)磷酰胺(CY)合用并不能增強CY對L<,1210>白血病小鼠的生命延長作用。 3．CPG、GAG-l、GAG-2在實驗所選劑量(0.5ug/ml、5ug/ml、50ug/ml、500ug/ml)下，無明顯的直接抑制CAM血管生成作用，但CPG、GAG-1、

7、GAG-2在實驗所選 劑量(5ug／ml、50ug／m1)下跟5-FU(2．5ug/m1)合用時，均能顯著增敏5-FU的抑制CAM血管生成作用(P<0．01)，并呈一定的劑量效應關系，其中GAG-1、GAG-2增敏效果更顯著。 4．CPG完全能對抗環(huán)磷酰胺(CY)引起的胸腺萎縮，對正常小鼠的胸腺亦有明顯的增重作用；CPG還能抗CY引起的脾萎縮，對正常小鼠的脾則無明顯影響。CPG、GAG-1在體外均能顯著促進小鼠腹腔巨噬細

8、胞吞噬中性紅和產生NO的能力(P<0．01或P<0．05)，且具有劑量效應關系，相同劑量下，CPG對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅和產生NO的能力效果好于GAG-1。GAG-2對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅和產生NO的能力無明顯影響。CPG、GAG-1、GAG-2在體外均能直接促進小鼠脾淋巴細胞增殖(p<0．01)，并能協(xié)同ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞增殖(p<0．01)。 結論：珠母貝GAG有一定的抗L<,12l0>白血病作用。珠母