1、免疫活性肽是一類具有提高機體免疫系統(tǒng)功能、增強免疫細胞活性、增強機體抵抗外來細菌和病毒侵害能力的短肽，具有易被人體吸收和免疫源性低等諸多優(yōu)點。目前通過酶法制備的生物活性肽，在經(jīng)口服攝入人體時可能會在腸道被降解，并不能保證其生物活性。本研究針對目前酶法制備免疫活性肽的問題，采用模擬消化酶解的方式制備馬氏珠母貝全臟器免疫活性肽，并以體外免疫活性為指標(biāo)，結(jié)合超濾、凝膠層析、離子交換層析等技術(shù)對免疫活性肽精制，同時對制備的馬氏珠母貝全臟器免疫活

2、性寡肽組分的體內(nèi)免疫活性機理作了初步探討。以期為馬氏珠母貝全臟器的高值化利用及免疫活性肽保健食品的開發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。主要的研究結(jié)果如下:
　　(1)通過模擬胃腸消化的方式對馬氏珠母貝全臟器進行酶解，并利用人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)對胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶酶解階段的工藝過程進行模擬優(yōu)化。利用該方法獲得的優(yōu)化工藝參數(shù)為:復(fù)合酶添加量4500U/g(m胰蛋白酶∶m胰凝乳蛋白酶=6∶1)、料水比1∶2、酶解時間3.5h，在此條件下，分子量于2

3、00u-2000 u的活性肽得率可達到55％以上，并通過隨機抽取酶解參數(shù)驗證了預(yù)測的實驗結(jié)果，與理論值相符。
　　(2)利用超濾手段對馬氏珠母貝酶解產(chǎn)物進行分離，通過對分離各組分的基本成分及分子量分布的研究，證明超濾分離能達到較好的分離效果;并對各超濾組分氨基酸成分進行研究，推測馬氏珠母貝酶解產(chǎn)物氨基酸組成中存在較強的生物活性片段。
　　(3)利用體外免疫活性實驗作為指標(biāo)，結(jié)合Sephadex G-25凝膠柱層析、Capto

4、 Q強陰離子交換色譜、Sephadex G-15凝膠柱層析、Superdex Peptide肽柱的分離手段對馬氏珠母貝全臟器酶解產(chǎn)物超濾組分進行反復(fù)篩選純化，獲得了兩個具有免疫活性的肽段，并利用電噴霧靜電場離子阱串聯(lián)質(zhì)譜分別對兩個活性肽進行結(jié)構(gòu)表征。
　　分離得到的免疫活性肽SP1的分子量為245.0，為二肽，肽序列為Ala-Arg/Pro-Met;免疫活性肽SP2的分子量為274.0，為二肽，肽序列為Val-Arg。通過對最終分

5、離兩組分SP1和SP2的體外免疫活性實驗證明，這兩個經(jīng)過精制的免疫活性肽終產(chǎn)物在低濃度(0.3mg/mL)時都表現(xiàn)出優(yōu)異的體外免疫功能，在所有分離組分中，組分SP2的體外免疫性最強。
　　(4)通過動物實驗對馬氏珠母貝免疫活性寡肽的體內(nèi)免疫功能進行研究。結(jié)果表明，受試樣品能夠顯著提高小鼠淋巴細胞的轉(zhuǎn)化能力和體液免疫的水平(p＜0.05），同時極顯著地增強經(jīng)抗原誘導(dǎo)的小鼠免疫應(yīng)答能力(p＜0.01);但對小鼠非特異性免疫功能的影響較