1、背景及目的：逼尿肌不穩(wěn)定(Detrusorinstability，DI)是常見的一種膀胱功能障礙，常引起尿頻、尿急、急迫性尿失禁等臨床癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致腎臟、輸尿管積水和腎功能損害。DI的發(fā)病機(jī)理尚不清楚，一直存在著神經(jīng)源性和肌源性的爭(zhēng)論。近年來資料顯示逼尿肌具有自律性，DI與逼尿肌自發(fā)興奮能力增強(qiáng)有關(guān)，發(fā)生DI的最終環(huán)節(jié)是逼尿肌細(xì)胞的興奮性增高，是一種肌源性的興奮改變。 Ca2+在逼尿肌細(xì)胞的興奮發(fā)生與調(diào)節(jié)機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。

2、作為次級(jí)信號(hào)分子在逼尿肌的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起非常重要的作用，對(duì)逼尿肌舒縮功能的調(diào)節(jié)在很大程度上取決于對(duì)Ca2+的調(diào)節(jié)。逼尿肌細(xì)胞興奮的前提是Ca2+內(nèi)流入胞，導(dǎo)致膜電位發(fā)生改變，使電壓依賴性離子通道激活，細(xì)胞去極化；同時(shí)，Ca2+發(fā)揮第二信使作用，激活其它依賴性離子通道與受體，共同參與細(xì)胞動(dòng)作電位的引發(fā)；另外膀胱逼尿肌的收縮也依賴于逼尿肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的升高。 整合素(Integrin)作為一種跨膜蛋白普遍存在于多種組織細(xì)胞，

3、是由α及β亞基通過非共價(jià)鍵組成的異二聚體蛋白受體家族，它不是單純的黏附分子，它還參與了一種雙向的信號(hào)傳遞過程：將信息從細(xì)胞外基質(zhì)傳遞到細(xì)胞內(nèi)部，同時(shí)細(xì)胞內(nèi)部的事件也可以影響它們和配體之間的親和性。近年來在心肌細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，整合素受體可介導(dǎo)Ca2+電流信號(hào)。 本課題以此為切入點(diǎn)，觀察正常及DI逼尿肌中整合素β3亞基的表達(dá)，研究整合素β3亞基對(duì)逼尿肌細(xì)胞Ca2+通道功能的影響，以探討整合素β3亞基對(duì)逼尿肌細(xì)胞興奮性的影

4、響。 方法：本實(shí)驗(yàn)通過膀胱頸不全結(jié)扎的方法，建立了穩(wěn)定、合理的大鼠BOO后引起DI的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。在清醒狀態(tài)下膀胱測(cè)壓，根據(jù)測(cè)壓結(jié)果分為：逼尿肌穩(wěn)定組即正常對(duì)照組(controlgroup)、逼尿肌不穩(wěn)定組(Detrusorinstabilitygroup)。采用膠原酶消化法急性分離、培養(yǎng)逼尿肌細(xì)胞，并采用免疫組化法鑒定逼尿肌細(xì)胞。應(yīng)用免疫組化法、RT-PCR及Westernblotting方法，從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平檢測(cè)整合素β3亞

5、基基因及其蛋白在DI逼尿肌中的表達(dá)變化。采用激光共聚焦技術(shù)動(dòng)態(tài)檢測(cè)整合素β3亞基對(duì)逼尿肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的影響，運(yùn)用膜片鉗技術(shù)檢測(cè)整合素β3亞基對(duì)逼尿肌細(xì)胞Ca2+電流的影響。 結(jié)果：主要研究結(jié)果如下： 1、采用膀胱頸不全結(jié)扎的方法建立的動(dòng)物模型可穩(wěn)定、合理的模擬BOO所致的逼尿肌不穩(wěn)定(DI)。 2、整合素β3mRNA在DI及正常組膀胱逼尿肌中均有表達(dá)。DI組中整合素β3mRNA表達(dá)較正常明顯增加，兩組相比較

6、具有顯著性差異。 3、DI組逼尿肌組織中有高水平的整合素β3蛋白表達(dá)，與對(duì)照組相比較增加2.6倍，兩組相比較具有顯著性差異。 4、激光共聚焦動(dòng)態(tài)檢測(cè)逼尿肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，細(xì)胞外液加入整合素β3單抗后，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度明顯降低。 5、細(xì)胞外液加入T型鈣通道阻滯劑NiCl2，再加入整合素β3單抗，可觀察到細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度明顯降低。 6、細(xì)胞外液加入L型鈣通道阻滯劑nefedipine，再加入整合素β3

7、單抗，可觀察到細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度無顯著變化。 7、運(yùn)用膜片鉗技術(shù)，細(xì)胞外液加入整合素β3單抗后，細(xì)胞膜Ca2+電流明顯降低。 結(jié)論： 1、整合素β3亞基在正常對(duì)照組及DI組中均有表達(dá)，在DI組中的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，兩組之間相差顯著。 2、在正常及DI逼尿肌細(xì)胞中均可以觀察到整合素β3單抗可以影響細(xì)胞的鈣通道，這種影響是有選擇性的，只影響了L-型鈣通道的活性。 3、整合素β3單抗可抑制逼尿肌細(xì)