1、背景與目的：腫瘤是一個(gè)重要的公眾健康問(wèn)題。在世界范圍內(nèi)，結(jié)直腸癌是第3位的常見惡性腫瘤，結(jié)直腸癌預(yù)后差主要原因在于其復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。新近研究表明，趨化性細(xì)胞因子及其受體的相互作用可能在癌細(xì)胞的遷徙轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著極其重要的作用。自第一個(gè)趨化因子于80年代末被確認(rèn)以來(lái)，迄今已發(fā)現(xiàn)至少50種趨化因子。其中最令人矚目的是趨化因子受體CXCR4與其配體CXCL12的相互作用，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)趨化因子CXCL12及其受體CXCR4在胚胎發(fā)育，造血干細(xì)胞的遷移和各

2、種免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用,是許多生理和病理過(guò)程中指導(dǎo)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的中心因素。CXCR4并不是腫瘤特異性標(biāo)記物,CXCR4作為趨化因子受體廣泛存在于許多正常組織，Muller報(bào)道了在大鼠模型中CXCR4與其配體CXCL12共同作用導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移后，該趨化因子及其受體對(duì)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移作用的影響受到廣泛重視。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的生長(zhǎng)，侵襲，轉(zhuǎn)移和分泌密切相關(guān)。目前研究發(fā)現(xiàn)趨化因子受體CXCR4在多種器官腫瘤中高表達(dá),本研究著重從CXCR4分子在

3、臨床結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其意義方面入手，同時(shí)研究趨化因子受體CXCR4在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為中的作用。 方法：①評(píng)定CXCR4基因亞型在結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況，同時(shí)利用半定量PCR分析該基因在結(jié)直腸正常組織與腫瘤組織中的表達(dá)情況。②收集結(jié)直腸癌患者腫瘤標(biāo)本，利用組織芯片和免疫組織化學(xué)等技術(shù)手段，分析CXCR4 在49例結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況。③利用結(jié)直腸癌細(xì)胞株為載體，采用實(shí)時(shí)定量PCR 及WESTERN blot蛋白印跡

4、法分析該趨化因子受體于基因與蛋白水平上在各種結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)，篩選高表達(dá)的細(xì)胞株，同時(shí)行細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果:1.CXCR4基因有兩個(gè)亞型,PCR 證實(shí)CXCR4A 在結(jié)直腸癌中幾乎不表達(dá)，而CXCR4B 在結(jié)直腸癌中相對(duì)高表達(dá)。2.利用實(shí)時(shí)定量PCR 分析CXCR4 在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的表達(dá)情況，結(jié)果表明HT29細(xì)胞中CXCR4 表達(dá)量最高，HCT116 幾乎不表達(dá)，而SW480、SW620、LoVo、COLO205、C

5、aCO2、SW1116的表達(dá)介于以上二者之間。蛋白水平上，CXCR4蛋白在結(jié)腸直腸癌細(xì)胞株SW480、HT29、SW620、COLO205中表達(dá)較高,在SW11116和LoVo中表達(dá)較低,在HCT116和CaCO2中不表達(dá)。3.組織芯片的免疫組化染色顯示，CXCR4 在結(jié)腸直腸癌組織中（陽(yáng)性率為71.4％）表達(dá)高于正常結(jié)腸直腸黏膜組織（陽(yáng)性率為11.1％），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在結(jié)腸直腸癌組織中，伴發(fā)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的CXCR4 表達(dá)明顯高

6、于未發(fā)生轉(zhuǎn)移者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；同時(shí)，在不同的結(jié)腸直腸癌TNM 分期者中，Ⅲ期和Ⅳ期者CXCR4表達(dá)明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但CXCR4的表達(dá)與病人的年齡、性別、腫瘤細(xì)胞分化程度及腫瘤發(fā)生部位無(wú)相關(guān)性。4.轉(zhuǎn)染CXCR4 SiRNA 后明顯抑制CXCR4基因的表達(dá)，經(jīng)CXCR4 SiRNA 作用的SW480細(xì)胞，經(jīng)Transwell 小室遷移試驗(yàn)后，CXCR4 SiRNA組轉(zhuǎn)移細(xì)胞數(shù)目均低于陰性siRNA組和對(duì)照組