1、目的：眼附屬器淋巴瘤在眼眶惡性腫瘤中發(fā)病率較高，居第三位。眼附屬器淋巴瘤中最常見的為黏膜相關淋巴瘤，為小細胞淋巴瘤，其形態(tài)學改變與反應性增生相似，給診斷帶來困難，從而影響治療方案的選擇和預后的判斷。近年來隨著免疫組織化學和分子生物學的發(fā)展，鑒別手段大大提高。本組試驗采用聚合酶鏈反應技術，對淋巴瘤標本的IgH基因的FRⅡ區(qū)和FRⅢ區(qū)進行基因重排檢測，經高分辨率瓊脂糖凝膠電泳分析擴增產物在目的范圍內的條帶情況，分析該方法在眼眶淋巴瘤診斷中的

2、價值。我們收集我院病理室保存的已經明確診斷的石蠟包埋的淋巴瘤標本50例，檢測其PCR擴增產物情況，觀察其陽性率，從而推測其在眼附屬器淋巴瘤的診斷價值。同時收集部分淋巴細胞反應性增生標本，以同樣的方法進行基因重排檢測，進一步判斷PCR技術在眼附屬器淋巴瘤診斷，鑒別診斷中的價值。 方法：收集2002年1月-2009年3月本院病理室保存的我院手術切除或活檢的甲醛固定石蠟包埋的淋巴瘤標本50例，及淋巴細胞反應性增生標本15例，均除外感染

3、性疾?。ㄈ缂毦婢蚪Y核感染），Wegener肉芽腫及TAO等。每例標本均重新切片，行HE染色，和免疫組織化學染色（CD20，CD3，CD45Ro）。依據(jù)WHO2001年淋巴瘤分類標準進行診斷及分類，對于診斷困難的病例經天津市腫瘤醫(yī)院病理科會診，進一步明確診斷。 PCR檢測IgH基因重排檢測采用針對V區(qū)序列相對保守的FRⅡ、FR-Ⅲ區(qū)的FR2A、FR3A引物。 DNA提取試劑盒法提取甲醛固定石蠟包埋的淋巴瘤標本的DNA

4、，β-actinPCR擴增檢測提取的DNA質量，淘汰不合格者。采用半巢式PCR經過兩輪擴增得到目的產物。 高分辨率瓊脂糖凝膠電泳，紫外線照射下觀察產物在預期大小片段間出現(xiàn)條帶情況，判斷標本的克隆性。 結果判斷： 陽性：樣本擴增產物電泳后，在預期大小片段間出現(xiàn)1或2條清晰，間斷條帶者。（各PCR產物目的片段大小見表2） 陰性：在預期大小片段間出現(xiàn)彌漫帶或無特異帶者。 判斷陽性結果的公認原則：（1）帶

5、寬不超過1mm，邊緣整齊；（2）條帶在期望的堿基大小范圍之內；（3）如背景上無Smear，又無引物二聚體則表示PCR擴增失敗，而非陰性；（4）如果出現(xiàn)期望大小之外的其他條帶，則應視為人工假象看待，不能作為判斷依據(jù)。 結果：淋巴瘤標本共50例，免疫組織化學檢查均為B細胞性非霍奇金淋巴瘤（B cell non Hodgkin lymphoma，B-NHL），其中36例為結外邊緣區(qū)B細胞淋巴瘤，黏膜相關淋巴組織型（MZL-MALT），

6、占72.0％；淋巴漿細胞性淋巴瘤8例，占16.0％；3例為彌漫性大細胞性淋巴瘤，占6.0％；濾泡性淋巴瘤2例，占4.0％；漿細胞瘤1例，占2.0％。其中β-actin檢測淘汰7個，標本太小未提取DNA者4例，剩39個納入實驗。淋巴細胞增生標本15個，β-actin檢測淘汰3個，剩12個納入實驗。 淋巴瘤標本FR2檢測陽性率79.49％，F(xiàn)R3檢測陽性率61.54％，兩者聯(lián)合陽性率（兩者有一項為陽性即判斷為陽性）可達92.31％。

7、淋巴增生標本FR2檢測陽性率33.33％，F(xiàn)R3檢測陽性率0.00％，兩者聯(lián)合陽性率（兩者有一項為陽性即判斷為陽性）33.33％。 淋巴瘤標本和淋巴增生標本的IgH基因重排檢測，兩者相比，陽性率有顯著性差異。（SPSS13.0統(tǒng)計軟件，四格表資料卡方檢驗的校正公式） 結論：聯(lián)合應用FR2，F(xiàn)R3檢測IgH基因重排對眼眶B細胞淋巴瘤的克隆性判斷準確且客觀，陽性率高。對常規(guī)方法不能確定病變性質的病例，有很高的輔助診斷價值。但