1、研究背景： 由于介入技術(shù)的廣泛應(yīng)用，使安全、快速恢復(fù)血流成為可能，這極大推動(dòng)了臨床對(duì)急性臟器缺血的治療。雖然快速恢復(fù)缺血器官血流灌注是重要的，但它卻可導(dǎo)致“缺血再灌注損傷”(IschemiaReperfusionInjury，IRinjury)，從而加劇局部損傷并能引起全身并發(fā)癥，使病人臨床預(yù)后較差?！翱刂菩栽俟嘧ⅰ?ControlledReperfusion，CR)通過對(duì)初始灌注期進(jìn)行干預(yù)，已成功應(yīng)用于器官移植及心臟外科領(lǐng)域，

2、被認(rèn)為有巨大潛力來提高臨床療效。但是“控制性再灌注”的概念在臨床應(yīng)用中仍然強(qiáng)調(diào)不足。重要原因之一是目前缺乏理想的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛠磉M(jìn)行系統(tǒng)深入的前臨床基礎(chǔ)研究。 本研究旨在以大鼠急性缺血后肢為實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，建立一種新的基于臨床應(yīng)用的控制性再灌注體內(nèi)模型，并以此對(duì)控制性再灌注后機(jī)體局部和系統(tǒng)功能恢復(fù)進(jìn)行評(píng)估，同時(shí)從蛋白分子水平對(duì)相關(guān)病理信號(hào)通路進(jìn)行研究，并進(jìn)一步探討其相關(guān)機(jī)制，為控制性再灌注廣泛應(yīng)用于臨床提供基礎(chǔ)研究支持。 材料與

3、方法： Ⅰ大鼠缺血后肢控制性再灌注模型的建立 首先誘導(dǎo)大鼠急性后肢缺血。與傳統(tǒng)模型不同之處，本實(shí)驗(yàn)將止血帶置于股鞘之下，后結(jié)扎股動(dòng)脈，開放股靜脈，防止由于股靜脈機(jī)械受壓而致靜脈瘀血。成功誘導(dǎo)后肢缺血后，通過同側(cè)腹壁下動(dòng)脈插管，微泵輔助下實(shí)行控制性再灌注。 Ⅱ控制性再灌注對(duì)大鼠重度后肢缺血后局部及系統(tǒng)功能的影響 大鼠隨機(jī)分為傳統(tǒng)手術(shù)組(n=7；缺血4小時(shí)后直接恢復(fù)血流灌注)和控制性再灌注組(n=7；缺血4小

4、時(shí)后在恢復(fù)血流灌注前以冷卻無氧肝素化林格氏液進(jìn)行預(yù)灌注)。兩組大鼠在再灌注4小時(shí)后處死，取材做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。每只大鼠采用非缺血后肢作為內(nèi)對(duì)照。分別檢測(cè)脛前肌含水量、骨骼肌形態(tài)結(jié)構(gòu)(光鏡)、肌收縮力變化。 Ⅲ控制性再灌注對(duì)缺血下肢保護(hù)作用的機(jī)制 大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=5)、傳統(tǒng)缺血再灌注組(n=10)、控制性再灌注組(n=10)，F(xiàn)etpps干預(yù)組(n=10)；除假手術(shù)組外，其他各組又隨機(jī)分為缺血后再灌注0h，4h兩亞組

5、，每亞組動(dòng)物各5只。分別于再灌注后0h，4h小時(shí)處死大鼠，取材做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。分別檢測(cè)骨骼肌中MDA含量、血漿CK水平，采用蛋白免疫印跡分析技術(shù)檢測(cè)不同灌注條件下缺血后肢肌肉中的硝基酪氨酸(3—nitrotyrosine，3—NT)水平時(shí)程變化及P13K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化情況。 結(jié)果： 1．經(jīng)大鼠腹壁下動(dòng)脈插管對(duì)缺血后肢實(shí)行在體控制性再灌注切實(shí)可行，該模型建立技術(shù)穩(wěn)定可靠。 2．與同組內(nèi)非缺血正常下肢相比，

6、缺血/再灌注損傷對(duì)傳統(tǒng)手術(shù)組和控制性再灌注組缺血后肢影響顯著，總濕干重比值增加為159±44％(P＜0.05)，而肌肉的活力和收縮力分別減少到65±13％(P＜0.05)和45±34％(P＜0.05)。然而與傳統(tǒng)手術(shù)組組間比較，控制性再灌注明顯減輕前述效應(yīng)，顯著降低組織水腫程度(132±16％和185±42％(P＜0.05)，更好地保存了肌肉活力(74±11％和57±9％(P＜0.05)和收縮力(68±40％和26±7％(P＜0.05)

7、。此外，各灌注時(shí)間點(diǎn)經(jīng)激光多普勒掃描雙后肢血流灌注，結(jié)果表明控制性再灌注組缺血后肢血流灌注恢復(fù)明顯優(yōu)于傳統(tǒng)手術(shù)組(P＜0.05)。 3．各灌注時(shí)間點(diǎn)，控制性灌注組血漿CK、MDA、NT水平顯著降低(P＜0.05)，Akt磷酸化水平顯著升高(P＜0.05)。 結(jié)論： 1．首次建立穩(wěn)定可靠，切實(shí)可行的大鼠后肢控制性再灌注體內(nèi)模型。 2．控制性再灌注明顯減輕下肢缺血再灌注損傷，顯著改善重度缺血后肢功能恢復(fù)。

8、 3．PI3K/Akt信號(hào)通路激活介導(dǎo)控制性再灌注對(duì)嚴(yán)重缺血下肢的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與減少自由基損傷和抗氧化作用加強(qiáng)有關(guān)。 4．本研究進(jìn)一步闡釋控制性再灌注的概念，并為其系統(tǒng)性應(yīng)用于臨床提供基礎(chǔ)研究支持。 展望： 本研究結(jié)果提示控制性再灌注的巨大臨床應(yīng)用潛力，并為進(jìn)一步推動(dòng)其廣泛應(yīng)用于臨床提供基礎(chǔ)研究支持，為治療急性缺血性下肢疾病，降低缺血再灌在損傷提供新的思路和對(duì)策。同時(shí)，通過本研究初步認(rèn)識(shí)到：活化PI3