1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文鼻咽癌候選抑瘤基因NPCEDRG表達(dá)調(diào)控的初步研究姓名：侯德富申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：陳主初20110422博士學(xué)位論文中文摘要度同源，說明MCNl基因是一個(gè)比較保守的基因。【生物信息學(xué)預(yù)測(cè)NPCEDRG基因表達(dá)調(diào)控元件】利用多種生物信息學(xué)軟件對(duì)NPCEDRG基因5’端上游調(diào)控區(qū)3500～500bp區(qū)域進(jìn)行分析。該區(qū)域存在2個(gè)CpG島，分別位于1573～960bp和一624～265bp，其

2、中624～265bp區(qū)域包含所有剪接變異體的第一外顯子及約600bp的5’末端上游調(diào)控序列，提示該區(qū)域可能為NPCEDRG基因的啟動(dòng)子區(qū)域并且在基因表達(dá)過程中起重要的調(diào)控作用。NPCEDRG基因可能有多個(gè)TSS位于225bp～137bp區(qū)間，主要介于ATG上游99bp～17bp區(qū)間。Gene2promoter軟件分析TSS位于73bp和49bp處，啟動(dòng)子介于624bp～75bp。PromoterInspector未預(yù)測(cè)到任何啟動(dòng)子區(qū)。綜

3、合分析各軟件預(yù)測(cè)結(jié)果，初步確定NPCEDRG啟動(dòng)子區(qū)可能介于624bp～75bp區(qū)間。選取人類MCNl基因5’末端上游調(diào)控區(qū)(625bp～250bp)875bp序列，采用MatlnspectorV22軟件和TESS軟件搜索轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。如圖17所示，均未檢測(cè)到經(jīng)典的TATA保守序列，但包含CCAAT、SPl、腫1、AP2、STATl、cMyb、AREB6、Nkx25、ZF5、E2F1、CREBPl和RBPⅨ等重要調(diào)控元件。利用在線程

4、序ECRBrowser進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化足跡分析，結(jié)果顯示在人和小鼠等6物種間在180bp～240bp區(qū)間約420bp序列高度保守，該保守區(qū)域中存在包括CCAAT，STATl和SPl／SPlQ2／SPlQ6／E2FQ2止強(qiáng)5／CACD等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。這些預(yù)測(cè)結(jié)果為進(jìn)一步鑒定NPCEDRG基因的啟動(dòng)子區(qū)及其調(diào)控元件，為探討其表達(dá)調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)?！綨PCEDRG基因在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)檢測(cè)及m砌蛆剪接變異體分析】利用RTPCR檢測(cè)11種

5、鼻咽癌細(xì)胞及4種其他腫瘤細(xì)胞中NPCEDRG基因總體mRNA和Af538150mRNA的表達(dá)情況，結(jié)果顯示NPCEDRG基因總mRNA表達(dá)在腿1和610B細(xì)胞中非常低，在其他細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)較高；而AF538150mRNA在卸虹1、玎虹2、Ⅷ呃3、C6661、腿1、HONEl、58F、610B、915及A549細(xì)胞中表達(dá)非常低，而在。姬1、CNE2、NP69、MCF7、HeLa及m60細(xì)胞中其表達(dá)相對(duì)較高。利用5’RACE、3’RACE和