1、作為一種晚期惡性腫瘤的常見并發(fā)癥，骨轉移的發(fā)生率約占全身轉移性腫瘤的15％.20％，僅次于肺轉移和肝轉移，居第三位。而在某些惡性腫瘤中，骨轉移的發(fā)生率要遠遠高于其他腫瘤，如多發(fā)性骨髓瘤(95％-100％)，乳腺癌和前列腺癌(65％-75％)，肺癌(30％-40％)。臨床上骨轉移常導致局部劇烈疼痛、病理性骨折、威脅生命的高鈣血癥、脊髓壓迫等神經癥狀，嚴重影響患者的生存質量，而且通常難以治愈。 骨轉移的發(fā)生機制在于腫瘤細胞本身的特性

2、、骨骼局部適宜腫瘤生長的微環(huán)境及兩者之間的相互作用。在骨轉移的發(fā)生過程中，由于骨組織微環(huán)境與腫瘤細胞的相互作用，使得腫瘤細胞具有特定的基因型，這種基因型在惡性腫瘤骨轉移的診斷與療效評估上正發(fā)揮越來越大的作用，亦可成為臨床治療惡性腫瘤骨轉移的理論依據。根據對乳腺癌、前列腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、肺癌的研究以及MILANO軟件分析，篩選出CXCR4、CTGF、MMP-1、IL-11、MST1R、ETV-1、COX2、OPN、ITGB3(CD61)

3、、EZH2、Tiaml、PTHrP、SALP、PLAU、CD44、OPG、Pleiotrophin、ADAMTS1、Erizin、TGF-β等二十個基因作為與鼻咽癌骨轉移發(fā)生發(fā)展密切相關的基因，它們通過不同的作用如：化學趨向作用、增強腫瘤細胞與血管內皮細胞的粘附性、降解局部基質、促進血管生成等作用促進惡性腫瘤骨轉移的發(fā)生。 鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)是我國南方及東南亞地區(qū)常見腫瘤之一，尤以廣

4、東省珠江三角洲一帶多見，故有“廣東瘤”之稱。流行病學調查顯示在廣東省鼻咽癌發(fā)病率可達男性30/10萬人口，女性13/10萬人口，足見其危害性之大。鼻咽癌遠處轉移最常見的部位是骨，據報道骨轉移在晚期鼻咽癌患者中的檢出率約為75％，中位生存期為5-9個月。因此，深入研究鼻咽癌骨轉移的分子機制，對于診斷并綜合各種手段有效控制骨痛和減少骨相關事件的發(fā)生，有著重要的意義。 采用SYBRGreenIQRT-PCR(quantitatiere

5、altimePCR)技術對靶基因進行實時熒光定量分析是近年來發(fā)展起來的一項新技術。SYBRGreenI是一種能與雙鏈DNA結合發(fā)光的熒光染料，因此，它的熒光信號強度與雙鏈DNA的數量相關，可以根據熒光信號檢測出PCR體系中存在的雙鏈DNA數量，對靶基因進行定量分析，準確性和靈敏性都比普通RT-PCR高，并且通過熔解曲線的分析，排除非特異性擴增的干擾。通過2-△△CT方法利用SYBRGreenIQRT-PCR技術能夠很好的分析基因表達相對

6、差異。用2-△△CT方法分析基因表達相對定量的方法在很多文獻中有報道，由于這種方法無需做標準曲線，因此比絕對定量方法更加簡便可行。 目前國內外關于鼻咽癌骨轉移的研究并不多見，加上建立鼻咽癌骨轉移的動物模型較難實現，我們通過腫瘤細胞與組織共培養(yǎng)的模型來模擬器官微環(huán)境對腫瘤細胞的影響：組織器官分泌的因子釋放至培基中，從而直接作用于腫瘤細胞；而腫瘤細胞所釋放的某些因子也將直接作用與組織器官，通過組織器官與腫瘤細胞之間的相互作用，從而影

7、響腫瘤轉移的發(fā)生發(fā)展。本研究通過檢測候選鼻咽癌骨轉移相關基因在鼻咽癌細胞株5-8F與骨組織共培養(yǎng)前后的表達差異，篩選出5-8F與骨轉移相關的基因；再通過5-8F與其他組織(肝、肺、腦)的共培養(yǎng)實驗確定其組織特異性。檢測方法采用準確性和靈敏性較高的QRT-PCR技術，從而從候選基因中篩選出鼻咽癌骨轉移相關基因；進一步通過流式細胞儀、WesternBlot以及其他鼻咽癌細胞(C666-1、CNE1、CNE2、6-10B)與骨共培養(yǎng)對篩選出的

8、基因進行驗證，初步探討鼻咽癌骨轉移的分子機制，為診斷鼻咽癌骨轉移、判斷預后以及探索新的治療策略提供靶標。 通過2-△△CT方法和t檢驗分析熒光實時定量PCR的實驗結果，表明在鼻咽癌細胞株中5.8F細胞中，CXCR4、CTGF、MST1R、ETV-1、COX2在與骨組織共培養(yǎng)后的表達上調(P<0.05)，TGF-β表達下調(P<0.05)，MMP-1、IL-11、OPN，ITGB3、EZH2，Tiaml，PTHrP、SALP，PL

9、AU，CD44，OPG，Pleiotrophin，ADAMTS1、Erizin表達無差別(P>0.05)，說明CXCR4、CTGF、MST1R、ETV-1、COX2這五個基因促進5-8F細胞骨轉移的發(fā)生。為了確定CXCR4、CTGF、MST1R、ETV-1、COX2這五個基因表達上調的骨組織特異性，我們檢測了該五種基因在5-8F細胞與不同的鼠組織(肝、肺、腦)共培養(yǎng)前后的表達情況。結果表明：CXCR4、MST1R、COX2三者僅在與骨組