1、目的：在建立HCMV感染Balb/c小鼠模型的基礎(chǔ)上，依據(jù)活體Balb/c小鼠模型導入組織學、基因表達、免疫學的研究，檢測模型小鼠椎間盤組織的感染狀態(tài)，同時觀察椎間盤組織的病理改變，初步探討HCMV感染Balb/c小鼠椎間盤組織及其變性的相關(guān)性，旨在為臨床腰痛的病因?qū)W、診斷與防治學研究提供了實驗依據(jù)。 方法：將安醫(yī)大微生物學教研室純化后的HCMV ADl69株分別取2×106pFU/ml、2×105PFU/ml、2×104PFU

2、/ml、2×103PU/ml和2×102PFU/ml五個病毒感染量腹腔注射6-8周SPF級Balb/c小鼠1.0ml/只，雌雄各6只。將濃度為2×106pFU/mI的病毒56℃30min滅活后1.0ml/只腹腔注射雌雄小鼠各6只作為滅活對照組。同株同代的HF細胞懸液l.0ml/只腹腔注射雌雄小鼠各6只作為HF細胞對照組，各組小鼠均在屏蔽系統(tǒng)中飼養(yǎng)。分別在病毒接種l、2、3個月后取組織進行實驗。用不同的方法檢測如下指標： (1)通過倒置顯

3、微鏡逐日觀察}tCMV致鼠椎間盤組織細胞病變效應(cytopathic effect，CPE)，并觀察其病變特征；(2)通過PCR和RT-PCR方法檢測鼠椎間盤組織細胞中與HCMV復制增殖的重要基因UL83.DNA和UL54 mRNA：(3)小鼠免疫狀態(tài)檢測：用間接ELISA法檢測小鼠血清中的HCMV IgG、IgM抗體水平；(4)椎間盤組織退變相關(guān)病理學檢測：艇染色檢測小鼠椎間盤組織構(gòu)筑和病理改變。 結(jié)果：(1)經(jīng)連續(xù)4～6

4、w觀察，發(fā)現(xiàn)2×106pFU/ml和2×105PFU/ml感染組的雌性小鼠椎間盤組織勻漿接種HF細胞出現(xiàn)病毒致細胞病變效應，可見椎間盤細胞腫脹、變圓，胞內(nèi)顆粒增多，折光性增強、脫落等病變：(2)PCR檢測刮取的病變細胞，在766bp處有HCMV UL83基因特異性的擴增條帶，其他各組在盲傳3代后均未發(fā)現(xiàn)細胞病變效應，PCR也未檢測到特異性條帶；RT-PCR檢測椎間盤組織中HCMV UL54基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物：2x106pFU/ml和2×105

5、PFU/ml感染組的雌性小鼠在142bp處檢測到特異性條帶，證實HCMV在椎間盤組織中為活動性感染； (3)小鼠免疫狀態(tài)檢測：間接ELISA檢測小鼠血清中的IgG、IgM抗體水平，感染組和病毒滅活組小鼠：IgG抗體均為陽性，HF細胞對照組為陰性， OD值分別為:0.7±0.06、0.5±0.04、　0.12±0.02，三組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。小鼠IgM抗體僅活動感染組為陽性，病毒滅活組和HF細胞對照組均為陰性，其OD

6、值分別為：0.534±0.15、0.134±0.02、0.08±0.01，活動感染組與病毒滅活組、HF細胞對照組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (4)小鼠椎間盤組織HE染色病理觀察結(jié)果：病毒活動性感染組小鼠椎間盤組織出現(xiàn)明顯的病理變化，鏡下可見纖維環(huán)板層結(jié)構(gòu)紊亂，部分髓核組織皺縮，髓核的脊索細胞和軟骨細胞排列不均勻，細胞數(shù)目減少，纖維環(huán)和髓核之間的過渡區(qū)變窄，關(guān)節(jié)軟骨鈣化層增厚，大量黏液及泡沫細胞，軟骨下血管明顯減少，局部灶性