1、目前,在燒傷創(chuàng)面治療中取自體皮片移植仍是最主要的方法,對(duì)于大面積燒傷患者來說自體皮源遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床需求,組織工程技術(shù)的發(fā)展使體外培養(yǎng)人表皮細(xì)胞的技術(shù)不斷得以完善,自體皮膚(主要是角朊細(xì)胞)體外快速擴(kuò)增為燒傷治療提供了廣闊的前景.經(jīng)典的角朊細(xì)胞培養(yǎng)方法以放射線處理的3T3細(xì)胞作為滋養(yǎng)層,以FAD作為培養(yǎng)基,角朊細(xì)胞體外培養(yǎng)周期一般需要2周,不能及時(shí)滿足臨床需要.該實(shí)驗(yàn)研究的目的即對(duì)傳統(tǒng)的人角朊細(xì)胞體外培養(yǎng)方法進(jìn)行研究及改進(jìn),利用絲裂霉素

2、處理的3T3細(xì)胞和人成纖維細(xì)胞分別作為滋養(yǎng)層,比較人角朊細(xì)胞在兩種細(xì)胞滋養(yǎng)層上體外培養(yǎng)融合的周期,以期找到能使人皮膚角朊細(xì)胞體外培養(yǎng)更快融合的培養(yǎng)體系.探索和尋找人角朊細(xì)胞體外培養(yǎng)適宜的滋養(yǎng)層細(xì)胞,完善人角朊細(xì)胞體外培養(yǎng)快速擴(kuò)增的技術(shù)和方法.該實(shí)驗(yàn)分別在3T3細(xì)胞、原代培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞上接種原代人角朊細(xì)胞,并設(shè)無滋養(yǎng)層細(xì)胞的空白對(duì)照.通過角朊細(xì)胞在不同滋養(yǎng)層上貼壁生長及融合時(shí)間的觀察,確定適合角朊細(xì)胞生長的最佳細(xì)胞滋養(yǎng)層.在對(duì)不同滋養(yǎng)

3、層細(xì)胞的處理上分別采用了鈷60放射線照射的傳統(tǒng)方法和絲裂霉素C處理,通過對(duì)處理前后成纖維細(xì)胞形態(tài)的改變以及存活時(shí)間的觀察,比較兩種處理方法對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞生物活性的影響.我們還在絲裂霉素對(duì)同一個(gè)體相同代數(shù)人成纖維細(xì)胞適宜的作用濃度方面進(jìn)行了研究,設(shè)計(jì)了3個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度的絲裂霉素C(5 μg/ml、1 0 μ g/ml、1 5μg/ml),分別處理人成纖維細(xì)胞及3T3細(xì)胞,以處理后細(xì)胞失去增殖能力為標(biāo)準(zhǔn),確定適宜的作用濃度.并對(duì)處理后成纖維細(xì)胞的