1、目的:通過(guò)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞V304的培養(yǎng),研究高濃度葡萄糖誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及其和氧化型低密度脂蛋白協(xié)同誘導(dǎo)凋亡的作用;研究鈣離子拮抗劑對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的抑制作用;通過(guò)凋亡相關(guān)基因Bcl-2,Caspase,c-myc及p21的表達(dá)探討凋亡發(fā)生的機(jī)制;進(jìn)一步揭示糖尿病狀態(tài)下動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的部分機(jī)制.方法:1.以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株V304為研究對(duì)象進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng),分別加入不同濃度葡萄糖.2.光學(xué)顯微鏡、相差顯微鏡下觀察內(nèi)皮細(xì)胞V3

2、04應(yīng)用不同濃度葡萄糖或/和氧化型低密度脂蛋白作用后細(xì)胞形態(tài)的改變;透射電鏡觀察細(xì)胞凋亡.3.采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色(MTT)法觀察不同濃度葡萄糖或/和氧化型低密度脂蛋白對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞V304增殖的影響.4.細(xì)胞凋亡小分子量DNA片段凝膠電泳法觀察內(nèi)皮細(xì)胞V304凋亡情況;流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞周期以及凋亡相關(guān)基因Bcl-2,Caspase,c-myc,及p21的蛋白表達(dá)量.5.激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度葡萄糖