1、細胞癌變時癌細胞膜上糖蛋白的寡糖鏈發(fā)生改變，即糖基異常變化。各種異常的糖蛋白糖基可影響細胞的正常功能，如細胞的識別和黏附功能障礙，這是導(dǎo)致細胞惡性轉(zhuǎn)化的分子基礎(chǔ)。 隨著基因組學(xué)、凝集素和質(zhì)譜等技術(shù)在糖鏈檢測中的應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)了許多與腫瘤相關(guān)的糖鏈結(jié)構(gòu)。β1，6分支是細胞膜復(fù)雜型N一糖鏈的一種分支結(jié)構(gòu)，文獻報道在結(jié)腸癌和肝癌細胞中β 1，6分支高表達，并且與預(yù)后差和腫瘤轉(zhuǎn)移程度具有相關(guān)性，動物實驗表明β1，6分支能夠促進腫瘤細胞在小鼠

2、體內(nèi)的轉(zhuǎn)移能力：體外實驗證明β 1，6分支高表達的細胞運動能力明顯增強。但最近有文獻報道在膀胱癌中β1，6分支的表達與預(yù)后較好有關(guān)，在神經(jīng)母細胞瘤中高表達GnT-V能夠促進腫瘤細胞的凋亡等等。因此β 1，6分支在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用以及作用機制有待于進一步研究。本論文的研究目的是觀察在小鼠乳腺癌細胞4TO7中β 1，6分支表達的差異對與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的細胞行為學(xué)的影響，并初步探討其對細胞遷移能力影響的機制。為腫瘤細胞膜糖鏈β1，6分支與腫瘤轉(zhuǎn)

3、移的關(guān)系研究提供了新途徑。 第一部分：細胞表面β 1，6分支糖鏈對小鼠乳腺癌細胞腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)行為學(xué)的影響本部分實驗用RNA干擾的方法構(gòu)建了GnT-V表達差異的兩株小鼠乳腺癌細胞4T07-siRNA3和4TO7-mock，并對它們的轉(zhuǎn)移相關(guān)細胞行為學(xué)進行了研究。 首先針對小鼠GnT-V的DNA序列設(shè)計并構(gòu)建了用于轉(zhuǎn)染小鼠乳腺癌4TO7細胞的干擾質(zhì)粒：pSi/encerU6-siRNA1，psilencefU6-siRNA2

4、和pSilenceru6-siRNA3。用以上質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞并挑取陽性單克隆。獲得了細胞表面表達β1，6分支降低約60％的細胞模型：4TO7-siRNA3。然后運用劃痕法、Transwell小室法檢測了4TO7-siRNA3細胞遷移行為的改變：用Metrigel模擬細胞外基質(zhì)，檢測了4TO7-siRNA3細胞侵襲行為的改變；運用細胞黏附實驗檢測了細胞與細胞外基質(zhì)FN黏附能力的改變：最后用熒光標記的鬼比環(huán)肽檢測細胞遷移時微絲的變化。結(jié)果表明

5、：相對于陰性對照4TO7-siRNA3細胞與FN黏附增強，遷移和侵襲能力降低，而且β1，6分支表達降低能夠影響細胞骨架actin的解聚和聚合功能。 第二部分：高表達β1，6分支糖鏈增強小鼠乳腺癌細胞4TO7遷移能力的機制探討本部分以β1，6分支對EGFR的影響為切入點對β1，6分支表達增高能夠顯著增強小鼠乳腺癌細胞4TO7遷移能力的機制進行了仞步探討。在表皮生長因子EGF的刺激下4TO7-mock細胞的遷移分為兩個階段，8小時之

6、后遷移速度存在著一個明顯的突躍。本部分實驗檢測了4TO7-siRNA3和4TO7-mock細胞上EGFR表達水平和EGFR上β1，6分支修飾，EGF刺激下兩株細胞遷移時EGFR的磷酸化、PKC-δ和Erk信號的激活情況，結(jié)果表明：EGFR上增加了的β 1，6分支糖鏈修飾能夠增強遷移的第二個階段中Erk和PKC-δ的信號強度，而抑制了與細胞骨架調(diào)節(jié)密切相關(guān)的RhoA的信號。β1，6分支通過增加EGFR的糖鏈修飾，進而影響其下游信號通路信號