1、Twist基因是1987年在果蠅中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新基因，能編碼堿性的螺旋-環(huán)-螺旋DNA結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子，在不同的種屬之間其核苷酸和氨基酸序列高度保守。人Twist基因位于7p21.2，含有2個(gè)外顯子和1個(gè)內(nèi)含子，其中第1個(gè)外顯子長(zhǎng)為772 bP.包含整個(gè)編碼區(qū)域。人Twist蛋白由202個(gè)氨基酸，分子量為26 kD，在胚胎的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。目前，Twist作為重要的癌基因，已證實(shí)在多種實(shí)體瘤中通過(guò)多種機(jī)制參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。到

2、目前為止，Twist與髓系白血病的關(guān)系尚不明確。
　　 為了探索Twist1在髓系白血病中的作用，我們首先構(gòu)建了Twist1的真核表達(dá)載體，利用慢病毒感染人白血病細(xì)胞系K562、U937，再通過(guò)。FACS分選獲得陽(yáng)性瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，并用qRT-PCR和Western blot方法鑒定轉(zhuǎn)染效果及目的基因的表達(dá)情況。通過(guò)生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞周期、集落形成實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)特性、集落形成能力，AnnexinV/7-AAD方法檢測(cè)腫

3、瘤細(xì)胞凋亡情況，transwell方法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的遷移能力，通過(guò)多藥耐藥實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了腫瘤細(xì)胞的生存能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與轉(zhuǎn)染空載體對(duì)照和未轉(zhuǎn)染的K562細(xì)胞相比，過(guò)表達(dá)Twist1的K562細(xì)胞生存能力顯著提高，遷移能力增強(qiáng)（p<0.05），細(xì)胞周期S期增加，對(duì)藥物的敏感程度下降。與K562細(xì)胞系相似，與轉(zhuǎn)染空載體對(duì)照和未轉(zhuǎn)染的U937細(xì)胞相比，過(guò)表達(dá)Twist1的U937也有同樣的效應(yīng)，即遷移能力增強(qiáng)，細(xì)胞周期S期顯著增加，生存能力顯著提

4、高，對(duì)藥物的敏感程度下降。提示Twist1對(duì)腫瘤細(xì)胞的生存和發(fā)展進(jìn)程起促進(jìn)作用并且誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞耐藥。
　　 我們進(jìn)一步用基因芯片研究了干擾Twist1表達(dá)的K562細(xì)胞株和轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞的基因表達(dá)差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，干擾Twist1表達(dá)的K562細(xì)胞株CDKN1C、CDC14B、ANAPC5等與細(xì)胞周期相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄上調(diào)，CCNE2、TFDP1等基因的下調(diào)，這與我們實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞周期的測(cè)定發(fā)現(xiàn)細(xì)胞阻滯在G1期相符，強(qiáng)烈抑制G1期向S期

5、的轉(zhuǎn)換。干擾Twist1 mRNA的表達(dá)結(jié)果提示，Twist1下調(diào)使慢性粒細(xì)胞白血病急變細(xì)胞系K562生長(zhǎng)抑制，提示Twist1對(duì)腫瘤細(xì)胞的生存是必不可少的。
　　 基因芯片研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，干擾Twist1表達(dá)的K562細(xì)胞株FOXO3、HIPK2等促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的腫瘤抑制基因均有較大程度上調(diào)，同時(shí)與自噬相關(guān)的基因如ATG12下調(diào)，使得腫瘤細(xì)胞凋亡增加同時(shí)對(duì)藥物的敏感性增加，這與實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合。提示Twist1對(duì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞耐