1、目的:胃癌是最常見的消化道惡性腫瘤,在我國其死亡率居惡性腫瘤之首?；熥鳛槟[瘤術(shù)后最有效的輔助治療手段,在防治腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移方面有著舉足輕重的作用。雖然目前胃癌的化療方案不斷完善,但部分胃癌患者對化療的療效并不理想,其中多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是導(dǎo)致化療失敗的根本所在。隨著現(xiàn)代制藥技術(shù)的發(fā)展,P-糖蛋白抑制劑對腫瘤耐藥性逆轉(zhuǎn)受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注,呈現(xiàn)出良好的前景。粉防己堿(tetrandrine

2、,Tet)是從中草藥粉防己的根塊中提取的雙芐基異喹啉生物堿,具有逆轉(zhuǎn)P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)作用。研究表明,粉防己堿具有較強的體內(nèi)外逆轉(zhuǎn)耐藥癌細胞活性,有可能用于臨床上耐藥胃癌的治療。奧沙利鉑(Oxaliplatin,L-OHP)是繼順鉑和卡鉑之后的第三代鉑類抗腫瘤藥,已逐漸作為治療進展期胃癌的主要藥物,且顯示出良好的應(yīng)用前景。目前P-gp

3、蛋白抑制劑粉防己堿逆轉(zhuǎn)胃癌的MDR及其與奧沙利鉑聯(lián)合應(yīng)用是否增加耐藥胃癌細胞對化療藥物的敏感性的相關(guān)研究較少。
　　 本試驗以胃癌細胞株SGC7901及胃癌耐藥細胞株SGC7901/VCR為研究對象,使用粉防己堿、L-OHP進行干預(yù),應(yīng)用細胞培養(yǎng)技術(shù)、細胞形態(tài)學(xué)、免疫細胞化學(xué)、流式細胞術(shù)及MTT法,觀察、檢測粉防己堿、L-OHP對細胞株SGC7901、SGC7901/VCR及MDR相關(guān)因子(P-gp、Survivin、GST-π

4、)表達影響及對細胞形態(tài)學(xué)和抑制率影響。探討粉防己堿對胃癌細胞MDR逆轉(zhuǎn)機制及其聯(lián)合L-OHP有效治療胃癌并減少耐藥性提供理論和實驗依據(jù)。
　　 方法:本實驗在胃癌細胞株SGC7901及耐藥細胞株SGC7901/VCR培養(yǎng)的基礎(chǔ)上進行研究,方法如下:
　　 1.1應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀察:SGC7901細胞組、SGC7901/VCR組、粉防己堿干預(yù)SGC7901/NCR組及粉防己堿聯(lián)合L-OHP干預(yù)SGC7901/VCR細胞

5、組的形態(tài)變化。
　　 1.2應(yīng)用MTT法檢測在490nm波長處A值,分別計算不同濃度的L-OHP在24h,48h,72h對SGC7901細胞組、SGC7901/VCR組的體外殺傷活性,應(yīng)用MTT測定粉防己堿體無明顯細胞毒劑量(IC1010％inhibitingconcentration,10％抑制率)及此劑量聯(lián)合L-OHP對SGC7901/VCR細胞48h的體外殺傷活性。
　　 1.3細胞免疫化學(xué)形態(tài)觀察P-gP、Sur

6、vivin、GST-π在SGC7901組、SGC7901/VCR組、及粉防己堿作用SGC7901/VCR細胞組48小時后染色變化。
　　 1.4流式細胞術(shù)檢測P-gP、Survivin、GST-π表達在SGC7901組、SGC7901/VCR組、及粉防己堿作用SGC7901/VCR細胞組48小時后蛋白表達量的變化。
　　 2統(tǒng)計方法
　　 實驗數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理,P＜0.05時認為差異具有顯著性。

7、
　　 結(jié)論:
　　 1 SGC7901/VCR細胞與SGC7901細胞均對L-OHP有多藥耐藥特性,SGC7901/VCR(IC:50:42.03μg/ml)比SGC7901(IC:50:6.58μg/ml)的耐藥性更強。
　　 2粉防已堿在無明顯細胞毒劑量(1.0μg/ml)下作用于SGC7901/VCR細胞48小時后SGC7901/VCR細胞的自然凋亡率由4.80％升高到6.55％.與自然凋亡率相比差異不明

8、顯。提示1.0μg/ml粉防已堿在此劑量下無明顯細胞毒作用,不顯著誘導(dǎo)細胞凋亡。
　　 3 L-OHP對SGC7901細胞和SGC7901/VCR細胞的體外殺傷活性在72h最強。且殺傷活性隨L-OHP濃度的增加而增強,SGC7901/VCR對L-OHP的耐藥倍數(shù)在48小時最大,SGC7901/VCR對L-OHP的耐受性較親代敏感株SGC7901增加了6.39倍,說明SGC790l/VCR對L-OHP耐藥性強。
　　 4粉

9、防已堿在無明顯細胞毒劑量(1.0μg/ml)聯(lián)合L-OHP可明顯降低化療藥物的劑量,有提高化療效果的作用。其作用機制與粉防已堿逆轉(zhuǎn)胃癌SGC7901/VCR細胞的多藥耐藥有關(guān)。
　　 5粉防已堿在無明顯細胞毒劑量(1.0μg/ml)有明顯逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR細胞多藥耐藥的作用,其作用機制與其抑制P-gp,Survivin的表達有關(guān),與GST-π無明顯關(guān)系。
　　 6粉防己堿有較好的體外逆轉(zhuǎn)MDR作用,且無明顯細胞毒