1、肝癌細(xì)胞的多藥耐藥性(multidrug resistance，MDR)形成是導(dǎo)致肝癌化療失敗的主要原因之一。肝癌細(xì)胞一旦獲得多藥耐藥性，則在對(duì)同一類型的藥物產(chǎn)生抗藥性的同時(shí)，對(duì)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制不同的抗腫瘤藥物均產(chǎn)生交叉耐藥性。多藥耐藥性形成直接關(guān)系到肝癌患者對(duì)化療的反應(yīng)和預(yù)后。經(jīng)研究現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)了導(dǎo)致MDR產(chǎn)生的多個(gè)表征蛋白及相關(guān)靶點(diǎn)，并據(jù)此研究出多種相應(yīng)的化療增敏藥物及治療方法，但均因各種原因限制了其應(yīng)用。MDR產(chǎn)生機(jī)制復(fù)雜,其中化療誘導(dǎo)

2、MDR產(chǎn)生的上游信號(hào)機(jī)制仍需進(jìn)行大量的探索工作。近年研究發(fā)現(xiàn),在血紅素代謝過程中,由血紅素加氧酶(heme oxygenase-1,HO-1)催化產(chǎn)生的多種物質(zhì)均具有細(xì)胞保護(hù)作用。HO-1在多種實(shí)體性腫瘤中均有高表達(dá)。因其具有保護(hù)細(xì)胞凋亡的作用，提示HO-1可能是抑制腫瘤生長的新靶標(biāo)。本課題以Bel/FU肝癌耐藥細(xì)胞株為研究對(duì)象，應(yīng)用氯化高鐵血紅素(Hemin)、鋅原卟啉(zinc protoporphyrin Ⅸ，ZnPP Ⅸ)、小分

3、子RNA干擾及中藥黃芪影響HO-1的表達(dá)，通過研究血紅素加氧酶在肝癌細(xì)胞多藥耐藥中的影響及相關(guān)信號(hào)分子機(jī)制，為逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥尋找新的作用靶點(diǎn)。 作用24小時(shí)，MTT法檢測細(xì)胞對(duì)各化療藥物敏感性：②：分別加入不同濃度梯度的Hemin(15umol/L，30umol/L，60umol/L，120umol/L，240umol/L)及ZnPP Ⅸ(2umol/L，6umol/L，10umol/L，14umol/L，18umol/L)誘

4、導(dǎo)培養(yǎng)24小時(shí)后，RT-PCR檢測血紅素加氧酶HO-1(heme oxygenase-1，HO-1)，MDR-1(multidrug resistance，MDR-1)，谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶GST-π(Glutathione S-transferase，GST-π)及B-actin核酸水平表達(dá)量Westernblot檢測P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-GP)，GST-π及β-actin蛋白質(zhì)水平表達(dá)量；③：設(shè)空白對(duì)照組后，

5、分別加入Hemin(60umol/L，240umol/L)和ZnPPⅨ(10umol/L，18umol/L)誘導(dǎo)，應(yīng)用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞內(nèi)羅丹明123的潴留以評(píng)估P-GP的功能。 結(jié)果：①：Hemin作用于Bel/FU細(xì)胞誘導(dǎo)24小時(shí)后，各化療藥物(5-FU，ADM及MMC)半數(shù)抑制濃度(IC50)與空白對(duì)照組比較各P值均<0.01，化療藥物半數(shù)抑制濃度均明顯增加 ZnPPⅨ干預(yù)組表現(xiàn)則相反，細(xì)胞活性降低，各化療藥物半數(shù)抑制濃度

6、均顯著降低；②Hemin作用于Bel/FU細(xì)胞誘導(dǎo)24小時(shí)后，與空白組比較，血紅素加氧酶HO-1在核酸水平的表達(dá)量明顯增加(F=71.513，其中2umol/L組P=0.029，余均<0.01)，MDR-1mRNA及GST-πmRNA的表達(dá)量、P-GP及GST-π的蛋白表達(dá)量也顯著增加(各P值均<0.01)，且均呈劑量依賴趨勢 ZnPPⅨ干預(yù)組表現(xiàn)則相反，各指標(biāo)均顯著降低，但也表現(xiàn)出劑量依賴趨勢；③：羅丹明潴留試驗(yàn)結(jié)果顯示：與空白組比較