1、目的：(1)分離培養(yǎng)、鑒定及GFP標記小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞并在體外向神經(jīng)樣細胞誘導分化；(2)構(gòu)建小鼠胸10脊髓損傷模型，并對其進行CXCR-4基因轉(zhuǎn)染的神經(jīng)樣BMSCs移植；(3)對BMSCs在脊髓損傷部位的定向歸巢情況及脊髓神經(jīng)的再生功能進行檢測。 方法：(1)經(jīng)密度離心法從C57BL/6小鼠骨髓內(nèi)分離培養(yǎng)BMSCs，并通過向成骨樣細胞、脂肪樣細胞分化證明其具有多向分化能力，利用流式細胞儀檢測其細胞表面標志物CD44和CD3

2、4的表達，利用腺病毒載體轉(zhuǎn)染GFP基因，并在體外實現(xiàn)其向神經(jīng)樣細胞的誘導分化。(2)利用脊髓橫切法構(gòu)建小鼠胸10脊髓損傷模型，實驗組通過尾靜脈注射經(jīng)過CXCR-4腺病毒載體轉(zhuǎn)染的BMSCs懸液，對照組分別選擇未行基因轉(zhuǎn)染的BMSCs懸液及無細胞的培養(yǎng)基進行尾靜脈注射。(3)利用免疫組化、激光共聚焦顯微鏡方法在移植術后的不同時相點檢測脊髓損傷部位組織GFP陽性細胞占所有細胞的比例、來源于BMSCs的神經(jīng)樣細胞占全部移植細胞的比例，判斷經(jīng)過

3、CXCR-4腺病毒載體轉(zhuǎn)染的神經(jīng)樣BMSCs在鼠體內(nèi)定向趨化的能力及其在修復損傷脊髓中的作用；并利用BBB法評估其神經(jīng)運動功能的恢復情況。 結(jié)果：(1)分離培養(yǎng)的BMSCs呈克隆樣生長，經(jīng)成骨誘導培養(yǎng)后出現(xiàn)鈣沉積，經(jīng)成脂肪誘導后形成脂肪滴，經(jīng)轉(zhuǎn)染標記后約80％呈GFP陽性，經(jīng)神經(jīng)樣細胞誘導后出現(xiàn)細胞形態(tài)變化及表達NSE(+)；(2)造模后，絕大多數(shù)小鼠出現(xiàn)明顯截癱(BBB<4分)，術后7天對隨機分組的小鼠順利實施尾靜脈細胞移植；

4、(3)移植術后各時相點，實驗組脊髓損傷局部GFP陽性BMSCs數(shù)量逐漸增多，且增多幅度明顯高于對照組；來源于BMSCs的神經(jīng)樣細胞占全部移植細胞的比例(分化率)辦高于對照組；小鼠神經(jīng)運動功能明顯恢復。 結(jié)論：(1)通過密度離心法可以從C57BL/6小鼠骨髓內(nèi)獲取的BMSCs，經(jīng)腺病毒載體轉(zhuǎn)染GFP基因后絕大部分呈現(xiàn)GFP陽性，并實現(xiàn)體外向神經(jīng)樣細胞的誘導分化；(2)成功構(gòu)建起小鼠脊髓損傷模型，并經(jīng)尾靜脈實施細胞移植；(3)經(jīng)過C