1、MicroRNAs是一類長約22個核苷酸、進化上高度保守的內(nèi)源性非編碼RNA，通過轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)靶基因發(fā)揮作用。許多miRNAs(如miR-124，miR-9a)在神經(jīng)細胞分化與增殖中起到了非常重要的作用。大鼠嗜鉻細胞瘤細胞(PC12細胞)具有神經(jīng)嵴源性，使用COCl2誘導(dǎo)48小時后，可以產(chǎn)生神經(jīng)突觸樣突起，因此PC12細胞常用作神經(jīng)細胞分化的模型。本論文探討了microRNA在PCl2細胞COCl2誘導(dǎo)分化過程中的作用。 首先

2、，我們使用CoCl2誘導(dǎo)PC12細胞分化，建立了缺氧.神經(jīng)分化的細胞模型。用150uM COCl2處理PC12細胞24h及48h后，缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α及HIF-1α下游基因VEGF表達升高，說明缺氧處理有效，并且在光鏡下可見PC12細胞出現(xiàn)類神經(jīng)元的分化。 然后，我們應(yīng)用microarray芯片技術(shù)，檢測PC12細胞COCl2誘導(dǎo)分化過程中348種大鼠miRNA的表達差異，結(jié)果提示COCl2誘導(dǎo)24h后，22個miRNA表

3、達上升，21個miRNA表達下調(diào)；COCl2誘導(dǎo)48h后，45個miRNA表達上升，30個miRNA表達下調(diào)。我們選定2個代表性的microRNA：miR27b(表達顯著下調(diào))和miR325-3p(表達顯著上調(diào))作為研究對象。并應(yīng)用RT，Real Time PCR試驗來驗證miRNA27b和miR325-3p在PC12細胞COCl2誘導(dǎo)分化過程中的表達差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR27b表達水平持續(xù)下降，miR325-3p表達水平持續(xù)上升，與芯片

4、結(jié)果一致。 在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用脂質(zhì)體向PC12細胞中轉(zhuǎn)染合成的成熟miR27b，在轉(zhuǎn)染后48小時， Real Time PCR實驗結(jié)果提示轉(zhuǎn)染后PC12細胞中miR27b含量明顯高于未轉(zhuǎn)染PC12細胞中miR27b的水平(15:1)，但轉(zhuǎn)染miR27b對PC12細胞CoCl2誘導(dǎo)分化過程并無明顯影響。同時，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法向CoCl2誘導(dǎo)的PC12細胞內(nèi)導(dǎo)入外源性miR325-3p反義序列，我們發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)miR325-3p反義序