1、蠐螬已成為世界性的重要的地下害蟲，它不僅為害花生、大豆等經(jīng)濟(jì)作物，還會(huì)對(duì)一些糧食作物（如小麥、玉米等）造成損失。據(jù)統(tǒng)計(jì)，蠐螬在我國(guó)的常年危害面積已超過(guò)一億畝次。針對(duì)蠐螬的防治，目前農(nóng)業(yè)上主要依賴化學(xué)農(nóng)藥，但是化學(xué)農(nóng)藥的大量應(yīng)用也帶來(lái)了一系列的問題，主要是其所造成的藥劑殘留容易引起人畜中毒;因此使用安全、有效、殺蟲特異性強(qiáng)的生物殺蟲劑——蘇云金芽胞桿菌（簡(jiǎn)稱Bt）對(duì)蠐螬進(jìn)行防治具有巨大的前景和優(yōu)勢(shì)。Bt在生長(zhǎng)過(guò)程中所產(chǎn)生的營(yíng)養(yǎng)期殺蟲蛋白（

2、Vip蛋白）和殺蟲晶體蛋白（Cry蛋白）對(duì)昆蟲具有特異的殺蟲活性，對(duì)人畜安全無(wú)害，所以在生物防治中得到廣泛的應(yīng)用?，F(xiàn)有的商業(yè)化的Bt殺蟲制劑主要針對(duì)鱗翅目(Lepidoptera)和雙翅目(Diptera)等害蟲，并且在害蟲控制方面的應(yīng)用也取得了巨大的成功;但是目前國(guó)內(nèi)對(duì)鞘翅目(Coleoptera)地下害蟲蠐螬高效的Bt殺蟲制劑的商品化產(chǎn)品尚處于空白階段，而為了能更好地提高Bt殺蟲劑防治蠐螬的效果，降低其價(jià)格，本文針對(duì)一種新型的用于防

3、治蠐螬的Bt顆粒劑開展了一系列的研究，主要包括以下幾個(gè)方面:
　　本研究首先構(gòu)建了Bt185-gfp菌株，將能夠表達(dá)綠色熒光蛋白的gfp基因與pSTK表達(dá)載體連接，利用Pery3Aa7啟動(dòng)子使Bt185在營(yíng)養(yǎng)期就可以表達(dá)綠色熒光蛋白，便于Bt185-gfp菌株的菌落統(tǒng)計(jì)。
　　同時(shí)，對(duì)適宜Bt增殖的培養(yǎng)基進(jìn)行了篩選，在選取得幾種營(yíng)養(yǎng)豐富的物質(zhì)中，Bt菌株在花生粕培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)效果最佳。此外，通過(guò)鏡檢觀察及SDS-PAGE分析

4、在花生粕培養(yǎng)基上Bt185菌株和HD73菌株的晶體蛋白形成情況，發(fā)現(xiàn)這兩種Bt菌株都能夠在花生粕培養(yǎng)基上形成完整的晶體（Bt185菌株形成球形晶體，HD73菌株形成菱形晶體），且在能夠清晰表達(dá)130 kDa的殺蟲蛋白條帶，說(shuō)明花生粕培養(yǎng)基并未影響B(tài)t伴胞晶體蛋白的產(chǎn)生和釋放。
　　進(jìn)一步定量地測(cè)定了Bt在花生粕培養(yǎng)基中的增殖情況，液體發(fā)酵培養(yǎng)的結(jié)果發(fā)現(xiàn):在花生粕培養(yǎng)基0.5％和1％濃度情況下其單位質(zhì)量花生粕所獲得的Bt活菌數(shù)量為1

5、816.67×108cfu/g，與實(shí)驗(yàn)室常用的LB培養(yǎng)基相比，在P＜0.05水平上無(wú)顯著性差異。隨后，將花生粕加入Bt菌粉后壓制成顆粒劑后分別測(cè)定了在無(wú)菌條件下及在土壤環(huán)境中Bt在顆粒劑中的活菌數(shù)量變化情況，結(jié)果顯示在這兩種環(huán)境中Bt在顆粒劑中活菌數(shù)量均顯著增加:在無(wú)菌條件下，顆粒劑中Bt活菌數(shù)量最高增加30倍左右，可達(dá)10.35×107 cfu/粒;將其包埋在土壤中時(shí)，顆粒劑內(nèi)Bt活菌數(shù)量最多為3.90×107 cfu/粒，增加了40

6、倍左右。
　　隨后，在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下利用壓制的顆粒劑對(duì)蠐螬進(jìn)行了生物活性測(cè)定，以花生粕加入Bt185菌粉壓制的顆粒為實(shí)驗(yàn)組，以微晶纖維素壓制的顆粒為對(duì)照組，在初始Bt185含菌量相同的情況下，死亡率由未加入花生粕的19％提高到加入后的61％，大大提高了其殺蟲活性。
　　此外，本研究針對(duì)花生粕中存在的大量可培養(yǎng)細(xì)菌這一問題，引入了膨化處理這一加工技術(shù)，操作過(guò)程簡(jiǎn)便快捷，能夠去除花生粕中大部分細(xì)菌，且可培養(yǎng)細(xì)菌去除率達(dá)到86.32

7、％，并且經(jīng)膨化處理后在花生粕濃度為1％情況下與高溫高壓滅菌的花生粕相比，對(duì)Bt的增殖能力相當(dāng)，因此，膨化處理是花生粕處理的一個(gè)很好的途徑。與此同時(shí)，幾株對(duì)土傳病害有防治作用的生防菌株在膨化處理額花生粕上生長(zhǎng)情況結(jié)果顯示，花生粕不僅能夠?yàn)锽t生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而且能夠有利于綠僵菌、枯草芽胞桿菌、解淀粉芽胞桿菌、萎縮芽胞桿菌以及木霉生長(zhǎng)。
　　本文圍繞用于蠐螬防治的Bt顆粒劑進(jìn)行了研究，篩選出花生粕這個(gè)適合Bt在土壤中生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，