1、目的:通過檢測慢性牙周炎患者病變部位與非病變部位以及牙周健康者齦下菌斑中牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis，P.gingivalis)的毒力因子——精氨酸-牙齦素B(arginine-gingipainB，RgpB)的基因多態(tài)性，探討不同P.gingivalis基因型在慢性牙周炎發(fā)生發(fā)展中所起的作用，為牙周病致病機(jī)制的研究提供有益的參考。 材料與方法:1.研究對象的選擇：實驗組選擇慢性牙周炎者42例，

2、對照組選擇牙周健康，年齡，性別與實驗組具可比性者20例。所有受試者均無全身系統(tǒng)性疾病，未接受牙周系統(tǒng)治療，近3個月未服用抗生素，無吸煙史，知情同意。 2.記錄牙周指數(shù)：所有檢查內(nèi)容均由同一檢查者完成。選擇牙周炎患者口腔中病變較重的部位與健康或僅存在輕度齦炎的部位和牙周健康者的健康部位，記錄探診出血指數(shù)(BleedingonProbing，BOP)，牙周探診深度(ProbingDepth，PD)，臨床附著喪失(ClinicalAt

3、tachmentLoss，CAL)及牙齒松動度(ToothMovement，TM)。 3.樣本采集及細(xì)菌培養(yǎng)：用無菌牙簽取被檢牙位齦下菌斑，一份置于1ml的PBS緩沖液中，-70℃保存待檢，另一份置于轉(zhuǎn)送液(TD液)中10倍系列稀釋后立即接種于BHI培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經(jīng)分離、傳代、增菌、生化鑒定后收集菌體。 4.P.gingivalis的檢測：酚-氯仿法提取DNA，用P.gingivalis16SrRNA特異引物PCR擴(kuò)增，

4、1.5％瓊脂糖凝膠電泳檢測。 5.rgpB基因多態(tài)性的檢測：設(shè)計引物對編碼rgpB催化域的基因(rgpBcatalyticdomain，rgpB-cd)進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)MboⅡ、BsrGⅠ雙酶切后，2％瓊脂糖凝膠電泳檢測。 6.統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，采用χ2檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。顯著水平：P＜0.05時有顯著性差異，P＜0.01時有高度顯著性差異。 結(jié)果:1.用培養(yǎng)法檢測病變部位、非病變部位及健康部

5、位P.gingivalis的檢出率分別為26.19％、16.67％和0％。病變部位與非病變部位之間P.gingivalis的檢出率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但與健康部位的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 2.PCR法檢測病變部位、非病變部位及健康部位P.gingivalis的檢出率分別為85.70％、76.19％和40.00％。病變部位與非病變部位之間P.gingivalis的檢出率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但兩者與健康部位的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。

6、 3.培養(yǎng)法與PCR法檢測P.gingivalis的陽性檢出率結(jié)果比較，PCR法陽性率高于培養(yǎng)法，具有高度顯著性差異。 4.病變部位、非病變部位及健康部位P.gingivalis的rgpB-cd基因的陽性檢出率分別為100.00％、90.63％和62.50％。病變部位與非病變部位之間P.gingivalis的rgpB-cd基因的檢出率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但與健康部位的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 5.從同一齦下菌斑樣本中收集

7、的不同P.gingivalis菌株rgpB-cd基因型檢測結(jié)果一致。 6.病變部位rgpB-cdⅠ～Ⅳ型P.gingivalis的檢出率分別為11.11％、36.11％、0％和52.78％，其中Ⅳ型的檢出率最高，其次為Ⅱ型，兩者間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，但均高于Ⅰ型和Ⅲ型且具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01)。 7.非病變部位rgpB-cdⅠ～Ⅳ型P.gingivalis的檢出率分別為17.24％、75.8

8、6％、3.45％和3.45％，其中Ⅱ型的檢出率最高且與Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型相比具有高度顯著性差異(P＜0.01)，而Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型之間的檢出率比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。 8.健康部位僅檢出rgpB-cdⅠ型和Ⅱ型P.gingivalis，檢出率分別為20.00％和80.00％。 9.rgpB-cdⅣ型在病變部位檢出率高于非病變部位，rgpB-cdⅡ型在病變部位檢出率低于非病變部位，且均具有高度顯著性差異(P＜0.01)，Ⅰ

9、型和Ⅲ型在三種牙周狀態(tài)下的檢出率無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。 結(jié)論:1.慢性牙周炎患者P.gingivalis的檢出率高于牙周健康者，提示P.gingivalis與慢性牙周炎有一定的相關(guān)性，且在牙周健康人群中同樣可檢出。 2.慢性牙周炎患者P.gingivalis的rgpB-cd基因的檢出率高于牙周健康者，推測rgpB-cd基因可能與P.gingivalis的致病性有關(guān)。 3.在同一位點上P.gingivali

10、s的rgpB-cd基因型存在一致性。 4.P.gingivalis的rgpB-cd基因存在多態(tài)性，病變部位rgpB-cdⅣ型P.gingivalis檢出率最高且高于非病變部位和牙周健康部位，推測rgpB-cdⅣ型P.gingivalis可能與慢性牙周炎的關(guān)系最密切，在致病過程中起主要作用；非病變部位和牙周健康部位rgpB-cdⅡ型P.gingivalis的檢出率最高且高于病變部位，推測Ⅱ型可能與慢性牙周炎無關(guān)，為正常人群或牙周健