1、目的：
　　 通過建立大鼠牙周炎模型檢測(cè)不同時(shí)段的大鼠上頜第一磨牙齦下人工定植的牙齦卟啉單胞菌濃度變化及牙齦素基因rgpB和kgp的改變探討在牙周炎發(fā)展的不同階段牙齦卟啉單胞菌致病基因的變化,為牙周病致病機(jī)制的研究提供有益的參考。
　　 材料與方法：
　　 1、研究對(duì)象的選擇；
　　 實(shí)驗(yàn)組選擇6周的成年雄鼠13只,平均體重200克。將接種細(xì)菌后4周和8周分為實(shí)驗(yàn)兩組,在4周和8周時(shí)再取口腔齦下菌斑共獲樣

2、本20例,空白對(duì)照組樣本選擇健康,年齡,性別與實(shí)驗(yàn)組均有可比性者3例。選擇牙齦卟啉單胞菌(P.gingivalis,Pg)高毒力株(模式株W83)作為接種定植細(xì)菌陽性對(duì)照。
　　 2、大鼠牙周炎模型的建立；
　　 每只大鼠選擇2個(gè)受試部位,即兩側(cè)上頜第一磨牙。麻醉后將大鼠兩個(gè)第一磨牙牙齦剝離1毫米左右,用0.2mm鋼絲結(jié)扎一周,細(xì)菌接種,2天接種一次,連續(xù)接種5次,接種的細(xì)菌濃度為1～109CFU/ml。在細(xì)菌接種兩周后

3、取大鼠齦下菌斑,BHI培養(yǎng)基培養(yǎng)一周后分離鑒定證明有P.gingivalis存在,從而確定定植細(xì)菌成功。
　　 3、提取DNA；
　　 將分別在實(shí)驗(yàn)組,空白對(duì)照組獲得的大鼠齦下菌斑采用細(xì)菌基因組DNM快速提取試劑盒提取DNA。
　　 4、PCR擴(kuò)增；
　　 選擇引物針對(duì)細(xì)菌全基因組DNA,P.gingivalis16SrDNA特異性基因,rgpB催化域的基因(rgpB-cd),kgp催化域的基因(kgp-

4、cd)進(jìn)行擴(kuò)增,2％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),測(cè)灰度值。
　　 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；
　　 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行兩個(gè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),P＜0.05有顯著性差異。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1、健康對(duì)照組Pg相對(duì)灰度值平均為1.85,占總細(xì)菌總量的百分比濃度平均為1.45％,實(shí)驗(yàn)4周組Pg相對(duì)灰度值平均為143.13,占總細(xì)菌總量的百分比濃度平均為66.30％,實(shí)驗(yàn)8周組Pg相對(duì)灰度值平均為206.41,占

5、總細(xì)菌總量的百分比濃度平均為81.20％,各組兩兩比較均存在顯著性差異。
　　 2、健康對(duì)照組kgp相對(duì)灰度值平均為0.41,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為22.16％。實(shí)驗(yàn)4周組kgp相對(duì)灰度值平均為119.28,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為83.34％,,實(shí)驗(yàn)8周組kgp相對(duì)灰度值平均為168.19,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為81.48％,實(shí)驗(yàn)組和健康對(duì)照組比較有顯著性差異,4周組和8周組比較無顯著性

6、差異。
　　 3、健康對(duì)照組rgpB相對(duì)灰度值平均為0.67,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為36.22％,實(shí)驗(yàn)4周組rgpB相對(duì)灰度值平均為99.76,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為69.70％,實(shí)驗(yàn)8周組rgpB相對(duì)灰度值平均為145.25,占Pg DNA總量的百分比濃度平均為70.40％,實(shí)驗(yàn)組和健康對(duì)照組比較有顯著性差異,4周組和8周組比較無顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 1、通過鋼絲結(jié)扎法和

7、人工定植牙齦卟啉單胞菌于大鼠齦溝內(nèi),使大鼠牙周炎模型建立成功。
　　 2、Pg的相對(duì)含量在4周和8周存在顯著性差異,說明在大鼠牙周炎發(fā)展過程中Pg在總細(xì)菌中所占比例有增高的趨勢(shì)。
　　 3、實(shí)驗(yàn)組與健康對(duì)照組在rgpB和kgp DNA相對(duì)含量上比較,無論4周和8周的rgpB和kgp DNA相對(duì)含量均顯著增高,而4周和8周在rgpB和kgpDNA相對(duì)含量上比較卻無顯著性差異,推測(cè)rgpB基因和kgp基因與牙周炎的致病性有關(guān)