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![人參二醇促進再生障礙性貧血小鼠骨髓間充質干細胞增殖及調節(jié)免疫的作用.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/19/12/5bbe39c9-b2a3-4609-9735-199aeea06b08/5bbe39c9-b2a3-4609-9735-199aeea06b081.gif)
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文檔簡介
1、目的:
觀察自行提取分離的人參二醇對免疫介導型再生障礙性貧血(再障)小鼠的療效,促進再障小鼠骨髓間充質干細胞(MSC)的增殖,及對T淋巴細胞亞群的免疫調節(jié)作用。
方法:
?、偃撬栀N壁法培養(yǎng)骨髓MSC,觀察原代細胞和傳代細胞形態(tài)、增殖狀況,及形成成纖維祖細胞集落(CFU-F)的能力。
?、诓捎贸晒羌毎⒅炯毎囵B(yǎng)體系,誘導充質干細胞向成骨細胞和成脂肪細胞分化,并分析骨髓MSC細胞免疫表型。
2、?、蹖SC與同種異體小鼠胸腺T淋巴細胞分別按1:25、1:50、1:100比例,共同培養(yǎng)7d,流式細胞術檢測各組CD4+、CD8+T淋巴細胞表達的變化。
?、躆TT法檢測不同濃度人參二醇5、10、25、50、100mg/L體外促進MSC增殖的作用。
⑤采用免疫介導法建立Babl/c小鼠再障模型,治療分7組,正常組、模型組、人參二醇低、中、高劑量組,陽性對照復方皂礬丸和環(huán)胞菌素A組,均灌胃治療14d。
⑥治療
3、后小鼠的一般情況,計數(shù)外周血白細胞、血小板,骨髓病理切片造血組織增生狀況。
?、咴僬闲∈蠊撬鐲FU-F集落生成的試驗,及人參二醇促進增殖的作用。人參二醇治療后各組小鼠骨髓細胞形成CFU-F集落的變化。
?、嘀委熀蟾鹘M外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞比值的變化。
結果:
?、倥囵B(yǎng)后MSC原代貼壁細胞形態(tài)不均一,可見梭形、圓形、三角形細胞。傳代細胞形態(tài)趨于均一,以梭形為主,CD44、CD29表達陽性,CD
4、45表達陰性;成骨培養(yǎng)體系誘導14d后茜素紅染色可見大量鈣化沉淀于胞外基質,成脂培養(yǎng)體系誘導21d后油紅“O”染色可見大量橙紅色脂肪滴。
?、贛SC與同種異體小鼠胸腺 T淋巴細胞共培養(yǎng), CD4+、CD8+T淋巴細胞均明顯低與對照組,提示MSC對CD4+、CD8+T淋巴細胞有抑制。
③MTT測定顯示人參二醇體外具有促進MSC增殖的作用,且呈現(xiàn)劑量-效應依賴關系。
④再障小鼠外周血的白細胞、血小板數(shù)量急劇下降,
5、骨髓病理切片造血細胞減少,造血組織被大量的脂肪組織代替,提示造模是成功的。
?、萑藚⒍贾委?、10、14d,再障小鼠的外周血白細胞、血小板數(shù)均顯著高于模型組。
?、拊僬夏P托∈蠊撬璧腃FU-F集落數(shù)明顯低于正常小鼠,而人參二醇各治療組的CFU-F集落數(shù)量均明顯高于模型組。
⑦再障小鼠體內T淋巴細胞亞群比例失調,CD4+/CD8+細胞比例倒置。人參二醇各治療組能夠顯著地降低再障異常增高的CD8+細胞數(shù),提高CD
6、4+細胞數(shù),而恢復CD4+/CD8+細胞比值。
結論:
人參二醇不但在體外能夠有效地促進小鼠骨髓MSC增殖,而且對再障小鼠體內病態(tài)造血狀態(tài)的MSC也同樣具有促進增殖作用,從而起到改善造血微環(huán)境的作用。人參二醇通過有效刺激骨髓粒系、紅系和巨核系三系造血祖細胞增殖,促進再障小鼠的血細胞生成,升高外周血白細胞和血小板數(shù)。免疫調節(jié)作用是能夠顯著地降低再障異常增高的CD8+細胞數(shù),提高CD4+細胞數(shù),而恢復CD4+/CD8+細
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