1、莽草酸(shikimic acid)為莽草酸途徑的重要次級(jí)代謝產(chǎn)物，是生產(chǎn)治療禽流感Tamiflu 的關(guān)鍵原料。傳統(tǒng)的莽草酸生產(chǎn)工藝為從八角中提取制備，該工藝會(huì)受到收割時(shí)間、產(chǎn)量、產(chǎn)地等因素影響，成本及產(chǎn)量受限。而通過(guò)生物技術(shù)合成莽草酸則不受植物原材料生產(chǎn)周期及產(chǎn)量的限制，并有望在產(chǎn)品成本上獲得突破。因此利用生物技術(shù)合成莽草酸具有重要的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。本文從以下三個(gè)方面，對(duì)莽草酸途徑以及發(fā)酵法生產(chǎn)莽草酸進(jìn)行了研究。 1、考察了草

2、甘膦對(duì)莽草酸途徑中莽草酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸含量的影響。加入草甘膦之后，莽草酸的含量比未加入草甘膦的對(duì)照組的含量明顯提高，芳香氨基酸的含量降低，證實(shí)在乳糖發(fā)酵短桿菌發(fā)酵產(chǎn)酸過(guò)程當(dāng)中，草甘膦的加入能抑制莽草酸途徑，促進(jìn)莽草酸的積累?？疾炝瞬莞熟⑻砑恿浚砑訒r(shí)間和處理時(shí)間對(duì)莽草酸發(fā)酵的影響。發(fā)現(xiàn)在生長(zhǎng)對(duì)數(shù)末期加入草甘膦(在低濃度范圍內(nèi))，莽草酸的含量隨著草甘膦的添加量和處理時(shí)間的延長(zhǎng)(24小時(shí)內(nèi))而增加。培養(yǎng)24小時(shí)，在發(fā)酵液中添加草

3、甘膦使其濃度為含量為2000μmol·L<'-1>時(shí)，發(fā)酵液中莽草酸的含量提高了7倍，達(dá)到377.26mg/L。 2、對(duì)備選菌進(jìn)行了形狀的鑒定，對(duì)三個(gè)菌的莽草酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸的含量測(cè)定，選用乳糖發(fā)酵短桿菌(CICC10227)作為原始出發(fā)菌株，采用復(fù)合誘變．混合發(fā)酵選育技術(shù)的思路，設(shè)計(jì)了三組紫外線-亞硝基胍復(fù)合誘變條件進(jìn)行誘變，然后將三組誘變后的所有菌株混合一起進(jìn)行發(fā)酵，用正交設(shè)計(jì)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，將其瓊脂培養(yǎng)基作為

4、篩選平板，獲得8株莽草酸途徑通量較好的菌株，11號(hào)菌莽草酸產(chǎn)量為365.01mg/L，苯丙氨酸產(chǎn)量為89.91mg/L，分別比原始菌提高了339％和89％。誘變后通過(guò)篩選平板篩選出的突變株中正向突變占所有篩選菌的62.5％，證明正向突變株在優(yōu)化的培養(yǎng)基上得到了較好的生長(zhǎng)繁殖，提高了誘變效率。 3、研究了莽草酸生產(chǎn)菌的最佳培養(yǎng)時(shí)間和最佳發(fā)酵時(shí)間、培養(yǎng)基優(yōu)化以及發(fā)酵條件的優(yōu)化。菌體在生長(zhǎng)15小時(shí)左右處于對(duì)數(shù)期，接種效果最好。葡萄糖1