1、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種潛伏的,最終致命的神經(jīng)退行性疾病,多發(fā)生在老年人,表現(xiàn)為進(jìn)行性認(rèn)知障礙,記憶丟失。AD的主要病理變化是:在皮質(zhì)和海馬區(qū),過度磷酸化的微管蛋白(tau蛋白)形成神經(jīng)纖維纏結(jié)(NFTs)并伴隨著炎癥反應(yīng),細(xì)胞外β樣淀粉蛋白(Aβ)沉積形成老年斑,反應(yīng)性膠質(zhì)增生。目前AD病因及發(fā)病機(jī)制仍不十分明確,缺乏有效的治療措施。因此,充分認(rèn)識(shí)AD的發(fā)病機(jī)制,尋找相應(yīng)治療措施是預(yù)防和治療A

2、D的關(guān)鍵。
　　炎性反應(yīng)是AD核心病理機(jī)制,炎癥介質(zhì)促進(jìn)了AD的發(fā)生與發(fā)展。在大腦海馬區(qū)沉積和聚集的Aβ能激活膠質(zhì)細(xì)胞,進(jìn)而激活神經(jīng)炎癥反應(yīng),包括反應(yīng)性氧中間體和炎癥因子如白介素-1β(IL-1β),白介素-6(IL-6),腫瘤壞死因子-α(TNF-α)。故在AD發(fā)展進(jìn)程中,抑制炎癥反應(yīng)可以減少神經(jīng)細(xì)胞的損傷,提高學(xué)習(xí)記憶能力。
　　文獻(xiàn)報(bào)道,離子通道蛋白可調(diào)控炎癥反應(yīng),影響炎癥因子分泌。瞬時(shí)受體電位M7通道(TRPM7)是

3、一種具有能通過Mg2+、Ca2+等離子的通道和絲/蘇氨酸蛋白激酶域雙重功能的膜蛋白。TRPM7在腦,腎,胃,肝臟等器官都有表達(dá)。TRPM7在缺氧神經(jīng)元死亡,腦缺血再灌注,心肌纖維化,家族性老年癡呆等炎性疾病中均發(fā)揮很重要的作用,但TRPM7與疾病中炎癥因子的合成與分泌的關(guān)系并不明確,其在AD中的作用尚未報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)就瞬時(shí)受體電位通道7(TRPM7)與炎癥因子在阿爾茨海默病的關(guān)系進(jìn)行探討。
　　主要內(nèi)容如下:
　　大鼠雙側(cè)海馬

4、CA1區(qū)注射Aβ25-35構(gòu)建AD動(dòng)物模型。通過行為學(xué)檢查(MWM)和組織學(xué)檢查包括HE染色和免疫組化檢測(cè)確定造模是否成功。RT-PCR檢測(cè)海馬TRPM7、TNF-αmRNA表達(dá),Western blot檢測(cè)海馬TNF-α蛋白表達(dá)。并進(jìn)一步通過Aβ25-35誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞構(gòu)建阿爾茨海默病體外模型,MTT法測(cè)定Aβ25-35誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞最佳作用濃度與時(shí)間點(diǎn),將人工合成抑制TRPM7基因的siRNA片段,通過脂質(zhì)體Lipo

5、fectamine TM 2000轉(zhuǎn)染到SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi);RT-PCR檢測(cè)TRPM7、NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA表達(dá),乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒的測(cè)定細(xì)胞上清乳酸脫氫酶(LDH)的含量;ELISA測(cè)定細(xì)胞上清中TNF-α、IL-6的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),大鼠模型組與對(duì)照組和NS組相比,大鼠海馬區(qū)TRPM7、TNF-αmRNA表達(dá)水平顯著增加,模型組與對(duì)照組和NS組相比,TNF-α蛋白表達(dá)水平顯著增加。轉(zhuǎn)染siRNA后SH-S