1、墨汁鬼傘(Coprinusatramentarius)又名柳樹(shù)蘑，柳樹(shù)鉆，是鬼傘屬中最有代表性的一種，在真菌界被認(rèn)定為一種不可食用品種，但其同時(shí)具有多種醫(yī)學(xué)保健功能。當(dāng)前關(guān)于墨汁鬼傘的研究報(bào)道主要是固體栽培及生物學(xué)特性研究，未見(jiàn)關(guān)于墨汁鬼傘液體發(fā)酵培養(yǎng)的報(bào)道，也沒(méi)有針對(duì)其生物活性物質(zhì)的深入研究。 本文對(duì)墨汁鬼傘進(jìn)行液體發(fā)酵深層培養(yǎng)，對(duì)影響液體發(fā)酵的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行全面研究，確定其初步培養(yǎng)條件，然后以菌體生長(zhǎng)和胞外多糖為指標(biāo)對(duì)

2、培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。通過(guò)全因子中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化表明：當(dāng)葡萄糖、玉米粉、麩皮、KH2PO4和MgSO4·7H2O分別為13.51、17.07、7.62、2.29和2.00g/L時(shí)，胞外多糖最大預(yù)測(cè)值為293.73mg/L；當(dāng)上述變量為10.07、18.02、11.63、1.58和4.00g/L時(shí)，菌絲體最大生長(zhǎng)量為6.24g/L。通過(guò)Box—Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到當(dāng)溫度、轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)時(shí)間

3、、裝液量分別為28.4℃、134.5r/min、119.28h、180.5mL/500mL時(shí)，胞外多糖最大預(yù)測(cè)值為415.58mg/L；當(dāng)上述變量為20.45℃、129r/min、75.12h、194.5mL/500mL時(shí)，菌絲體最大生長(zhǎng)量為7.26g/L。 對(duì)墨汁鬼傘發(fā)酵液進(jìn)行初步分離，得到六個(gè)粗組分，為胞內(nèi)外粗蛋白、粗多糖，及胞內(nèi)外去除蛋白和多糖的小分子組分。 體外試驗(yàn)表明，胞外蛋白和胞外多糖的抗氧化活性最強(qiáng)，非酶糖

4、基化反應(yīng)抑制率最高。劑量0.1mg/mL時(shí)，胞外蛋白羥自由基清除率為73.57％(同濃度Vc為66.74％)，超氧自由基清除率為79.36％(同濃度Vc為65.74％)；胞外多糖羥自由基清除率為59.10％，超氧自由基清除率為52.15％。劑量0.1mg/mL時(shí)，胞外蛋白和多糖非酶糖基化反應(yīng)抑制率分別為65.70％、42.36％?；钚则?yàn)證試驗(yàn)表明，墨汁鬼傘胞外多糖和胞外蛋白具有良好的抗氧化活性和降血糖功效。 為更好地發(fā)揮墨汁鬼傘

5、液體發(fā)酵成分的活性功能，需對(duì)活性粗組分進(jìn)行分離純化，精制成高純度的具有生物活性的制劑。本文對(duì)胞外蛋白和胞外多糖進(jìn)行了初步分離純化。采用AKTAexplorer100及與其相配套的標(biāo)準(zhǔn)DEAE—纖維素柱和標(biāo)準(zhǔn)凝膠柱對(duì)墨汁鬼傘胞外多糖進(jìn)行了初步分離純化。采用TOYOPEARLCM—650M、TOYOPEARLSP—650M離子交換柱對(duì)墨汁鬼傘胞外蛋白進(jìn)行分離，檢測(cè)各個(gè)組分的體外抗氧化活性，通過(guò)SDS-PAGE對(duì)活性組分的分子量進(jìn)行初步探明。